人肺癌细胞5-氟脲嘧啶耐药株的建立及其生物学特性分析.pdfVIP

浙江理工大学学报 ，第 27卷，第 1期，2010年 1月 JournalofZhejiangSci—TechUniversity Vo1．27，No．1，Jan．2010 文章编号：1673—3851(2010)01—0145一O4 人肺癌细胞 5一氟脲嘧啶耐药株的建立 及其生物学特性分析 陈 侃 ，丁陈峰，李东冬 ，裴梦蝶 (浙江理工大学生命科学院，杭州 310018) 摘 要：建立人肺癌 5一氟脲嘧啶 (5-Fluorouracil，5-FU)的耐药细胞株 H460／5一FU，并对其生物学特性进行分 析。实验采用浓度梯度递增法诱导肺癌细胞耐药，建立肺癌细胞耐药模型。采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)，计算 H460和 H46O／5一FU的半数抑制浓度 (IC。)及耐药系数 (RI)；通过流式细胞仪分析 H460和 H460／5一FU的细胞周 期分布 ；光镜观察细胞形态变化 ；通过流式细胞仪进行 SP(sidepopulation)细胞检测 ，比较 SP细胞所 占比例 ；做细胞 生长曲线和集落形成 实验观 察细胞 生长及 倍增情 况。结 果表 明 5-FU对 H460和 H460／5一FU的 IC5o分 别为 28．7 g／mL和9O．44 ／H ，RI为3．15；H460／5FU细胞倍增时间缓慢，DNA复制时间延长，且含有更多的SP细胞。 关键词：肺癌；5一氟脲嘧啶 ；耐药细胞株 中图分类号：R734．2 文献标识码 ：A 0 引 言 肺癌是危害人类健康的重要疾患，且随着环境污染的加重而 日趋严重。化疗是 目前肺癌治疗必不可少 的手段，而肺癌细胞多药耐药性是化疗失败的主要原因_l1]。肿瘤细胞药物耐受包括原发耐药和诱导耐受，前 者是指肿瘤细胞在治疗的初始阶段就对抗肿瘤药物产生耐药性，后者则是在化疗过程中肿瘤细胞对抗肿瘤 药物产生耐药性，两者涉及的生理机能可能极为相似 ，原发性耐受 由于没有敏感细胞作 比较，因而难以进行 研究。诱导耐受可以在体外经短期或长期诱导获得，并有敏感细胞作参照，比较容易对 比研究。 既往对于肺癌细胞的耐药研究主要集 中于用铂类、阿霉素、紫杉醇等药物诱导耐受_2]，用 5一氟脲嘧啶(5一 Fluorouracil，5一FU)研究肺癌耐药尚少。5一FU是治疗消化道肿瘤的首选药物，目前临床采用 5一FU雾化吸 入或联合顺铂化疗的方式进行肺癌治疗 。本研究以肺腺癌细胞系H460为靶细胞，诱导建立 了对 5一FU耐 受的细胞系H460／5一FU，并对其生物学特性进行分析，以期为肿瘤多药耐药的机制及肺癌肿瘤起源细胞的 研究提供细胞模型。 1 材料与方法 1．1 材料 人肺腺癌细胞系 H460为本所保存 ，培养基 DMEM、RPMI1640、胰蛋 白酶 (GIBCO公司)，胎牛血清 (PAA公司)，化疗药物 5一氟脲嘧啶(华鲁制药厂)，碘化丙啶 (propodiuniodide，PI)(SIGMA公司)，二 甲基 亚砜 (DMSO)(SIGMA公司)、Hoechst33342(SIGMA公司)、MTT试剂 (SIGMA公司)。 FACSAria型号的流式细胞仪(BD公司产品)，SW—CJ一1FB超净台(苏州净化设备有限公司)，DK一8D型 收稿 日期 ：2009--02—18 基金项 目：浙江省大学生新苗计划 (2008R40G2060029)；浙江省教育厅科研资助项 目 作者简介 ：陈 侃 (1977一)，女，陕西汉中人，助理研究员，从事肿瘤分子生物学方面研究。 146 浙 江 理 工 大 学 学 报 2010年 第 27卷 电热恒温水槽 (上海一恒科技有限公司)，XD~IB倒置生物显微镜 (OIYMPUS公司)，BCD-277冰箱 (博西 华家用电器有限公司)，U一2800紫外分光光度计 (HITACHI公司)。 1．2 方法 1．2．1 细胞培养及耐药细胞的诱导 H460细胞置于含 10 胎牛血清的DMEM培养基(内含青霉素 100U／mL、链霉素 1007g／mL)中常规 培养，条件为 37℃，5 CO ，每次取处于对数生长期的细胞用于实验。 采用逐步提高培养基中5一FU浓度的方法诱导肿瘤细胞