泛素相关蛋白1基因UBAP1与肿瘤抑制基因p16在急性白血病中的表达与研究.pdfVIP

目 录 一、摘要 中文论著摘要………………………………………………………………………1 英文论著摘要……………………………………………………………………“4 二、英文缩略语………………………………………………………………………．8 三、论文 前言…………………………………………………………………………………………………………“9 刖舌…………………………………………………………………………………………………………“ 材料与方法………………………………………………………………………¨9 结果………………………………………………………………………………12 讨论…………………………………………………………………………………………………………l5 结论…………………………………………………………………………………………………………17 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………18 五、参考文献…………………………………………………………………………19 六、附录 综述…………………………………………………………………………………………………………21 在学期间科研成绩………………………………………………………………29 致谢………………………………………………………………………………·30 个人简介…………………………………………………………………………‘31 ·中文论著摘要· 泛素相关蛋白1基因UBAPl与肿瘤抑制基因p16 在急性白血病中的表达研究 目 的 急性白血病的发病机制目前尚不明确，但研究表明细胞周期调控失常、增殖 异常、分化障碍、凋亡受阻等与其密切有关，并且许多因子如细胞周期蛋白及其 相关抑制剂、转录因子及其相关抑制剂等参与其中，并发挥十分重要的作用。 UBAPl是泛素相关蛋白家族的新成员，其结构中的UBA结构域能够介导靶 蛋白与泛素蛋白非共价结合，使靶蛋白发生泛素化，进而被26S蛋白酶体降解。 p16是细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂家族的一员，能够有效阻止细胞由Gl期进入 S期，从而发挥抑制细胞增殖的作用。 肿瘤的研究中表达水平不一，在急性白血病中至今尚无报道；p16基因在众多恶 性肿瘤组织中呈低表达，属于肿瘤抑制基因，并与急性白血病的发病密切相关。 本实验主要研究UBAPl基因和p16基因在急性白血病中的表达情况及二者的相关 性，将为急性白血病的病因学研究及靶基因治疗奠定重要的实验基础。 方 法 l、收集EDTA抗凝骨髓液35ml。来自中国医科大学附属盛京医院血液病治 疗中心2008年8月～2009年8月间门诊及住院的患者，其中初诊急性白血病患者 56例作为实验组，非恶性血液病患者22例作为对照组。采用Ficoll淋巴细胞分离 液提取骨髓标本中单个核细胞(MNC)，生理盐水洗涤两次后，每(2-8)×106个细 胞中加入lmlTrizol试剂，放入．80℃冰箱冻存。 逆转录试剂盒说明，利用逆转录．聚合酶链反应(1mPCR)技术合成eDNA，．80℃ 冰箱冻存。 GreenI 程有限公司设计并合成，定量反应试剂盒由TaKaRa公司提供，采用SYBR 荧光染料实时定量PCR法进行检测。将标准品梯度稀释4--．,5个浓度，每个浓度 分别取21xl作为模板进行扩增，通过定量分析软件构建目的基因和内参照基因的 标准曲线，根据标准曲线读取样本拷贝数，最终将目的基因与内参照基因拷贝数 的比值作为样本mRNA的相对量。反应结束后将扩增产物采用1．5％的琼脂糖凝 胶电泳紫外灯下照相观察。 4、收集同期病例组样本的肝素抗凝骨髓2--3ml，采用直接法和24h培养法 BX51显微镜下进行核型分 制备染色体，滴片、R显带、Giemsa染色，Olympus 2005)》描述核型。 析，根据《人类细胞遗传学国际命名体匍J(ISCN 基因和p16基因的mRNA表达水平在急性白血病