奶牛胚胎移植技术对比与研究和生产体系建立.pdf

摘要 牛胚胎移植主要包括：供受体同期发情、供体超数排卵、胚胎冷冻解冻和移植等关键环节， 本文通过对影响这些关键环节的技术进行对比研究，进而探讨适宜的生物技术，为奶牛胚胎移植 产业化提出高效能、低成本、稳定和操作简便的技术体系；对一些相关的胚胎生物技术，如活体 采卵、体外受精、胚胎性别鉴定等技术进行了研究探讨。 本文研究的主要内容：(～)诱导奶牛同期发情试剂和相关技术的对比研究。(二)提高牛 超数排卵效果技术研究。(三)牛胚胎移植的主要影响因素研究。(四)活体采卵(OPU)及体 (五)奶牛胚胎性别鉴定技术的应用研究。 外受精(IvF)技术的应用研究。 诱导奶牛同期发情试剂和相关技术的对比研究：用含孕酮阴道栓、PG等几种方法，对不同状 况的牛群进行同期发情处理，根据发情率、黄体合格率、受体移植可用率、妊娠率以及超数排卵 获取的可用胚数，进行发情程度、效果的对比分析研究。研究结果表明：不同方法的诱导发情完 全可以替代自然发情，孕酮阴道栓加PG诱导发情的方法不受发情周期的限制，可以随时进行处理， 国产的孕酮海绵栓和进口的∞R对发情程度的影响差异不显著，用国产孕酮海绵栓完全可以替 代进口CIDR，成本下降70％左右；在不同的牛群，营养状况水平较高的牛群同期发情水平极显著 高于其他牛群，本结论对胚胎移植的供、受体牛的选择具有重要意义。产犊超过3个月的经产牛 的同期发情率都显著高于产犊不足3个月的经产牛的同期发情率(P(0．01)。 提高牛超数排卵效果技术研究：在自然发情周期的第9天，开始注射FOLLITROPIN—V超排 用含孕激素阴道拴+雌激素+孕激素处理后，超排效果显著高于单独使用阴道拴组和阴道拴配合孕 激素组，说明雌激素对超排具有明显促进作用；应用阴道拴配合雌激素和孕激素处理后超排，与 应用进口阴道拴 在发情周期的第8．12天开始的传统超排方法比较，结果差异显著(PtO．05)； CIDR和国产“牛欢”(海绵阴道栓)配合雌激素和孕激素处理后开始超排，对青年牛和成母牛 超排反应均没有差异(Po．05)，国产的阴道海绵栓可以代替进口的CIDR，成本下降70％左右； 短期重复超排f间隔25天．28天1处理次数对超排效果与传统方法比较差异不显著(P0．05)，应 用阴道拴诱导卵泡波同步发生后开始超排处理后可以提高重复超排处理次数，提高超排效率，增 加胚胎年产量，采用重复超排技术，每年超排次数可高达10次，每头牛可年产达60枚以上，而传 统方法只能达N4次左右。所获得的可用胚胎也只有24枚左右。 本文就影响牛体内胚胎移植妊娠率的主要因素进行研究分析，结果如下：1．5M乙二酵，10％ 的甘油和EFS40(玻璃化冷冻液)三种不同的胚胎冷冻法对受体的妊娠率没有明显的差别。在牛 胚胎移植产业化中可相互补充，尤其乙二醇作为冷冻保护液，可以达到解冻后直接移植的目的， 简化操作，便于大规模推广应用；致密桑椹胚的移植妊娠率略高于早期囊胚和囊胚，但三者的移 植妊娠率差异不显著(P0．05)；胚胎与受体的同步差±12小时内不影响受体移植妊娠率，但 桑椹胚移植给发情6天以下和8天以上的受体以及早期囊胚和囊胚移植给不足7天和大于8天的受 体，妊娠率均明显降低(P0．05)；半胚、双半胚和整胚移植妊娠率差异不显著(P0．05)，但 从产犊数／胚胎数的比例来看，三者的差异明显(PO．05)，单半胚移植可明显提高胚胎的利用率； 草原放牧牛的移植妊娠率显著低于草原放牧牛补料和标准舍饲牛的移植妊娠率(P0．01)，说明 不同管理水平对牛胚胎移植妊娠率有很大地影响； 不同受体牛品种对胚胎移植妊娠率也有一定 影响，黄牛受体移植妊娠率显著低于奶牛受体(P0．05)。 话体采卵(OFU)与体外受精(IVF)技术研究：研究结果表明，无论是青年母牛还是成 年母牛，每周采两次卵的头均获卵数高于每周一次，差异极显著(PO．01)；成年牛每周两次 采卵头均获卵数显著高于青年牛(P仉D5)，抽吸负压极显著影响卵子回收率和优质卵子率(P O．01)，40mmHg负压适宜采卵；应用活体采卵技术可以对老龄牛、早期妊娠牛、繁殖障碍 牛等进行采卵，但头均获卵数明显低于健康牛，差异极显著(PO．01)，建议在活体采卵前通 过激素处理来促进卵泡发育，以提高获卵数。体外受精技术研究中，IVMD．101组无论是成熟 育液的培养效果相近