耐受性树突状细胞来源的exosome治疗小鼠免疫介导性再生障碍性贫血实验与研究.pdf

lUlI I I I[1111II II IIUl Y1747004 摘要 摘要 目的： dendritic ceils，tDCs)来源的 分离纯化耐受性树突状细胞(tolerogenic exosolTle(tDex)，探索其对免疫介导性再生障碍性贫血模型小鼠造血功能的影 响及其在免疫调节中的作用。 方法： 采用雌性Balb／c小鼠为供体，雌性昆明小鼠为受体。取供体小鼠骨髓细胞， 分离单个核细胞。在含10％胎牛血清的RPMI1640培养基中加入GM．CSF 40ns／ml+DXM 20ng／ml+VIP 10ng／ml进行体外诱导培养；收集上清液，经超速 离心分离纯化tDex，Bradford法进行蛋白定量。光镜下动态观察tDCs细胞形态， CD80、CD86、CD40、CDllc、 电镜下观察tDex形态，流式细胞术检测tDCs和tDex Fas—L表达。MTT法检测tDex刺激淋巴细胞增殖活性。共120只小鼠随机分为 下列各组：1)正常对照组：为正常小鼠不做任何处理：2)模型组：昆明小 鼠经X射线亚致死量(7Gy)全身均匀照射后，于4小时内自尾静脉输入Balb／c 只；4)tDex1组：a：tDex 10ug／只，c：tDex20ug／只；5)tDex Sug／只，b：tDex 2组分别于d0，d3，d7天输入tDex 8ug／只。动态观察小鼠外周血细胞变化，小 鼠濒死时(或制模后第28天)，取股骨行骨髓病理切片观察，计数单侧股骨骨 髓有核细胞数，甲基纤维素半固体培养法测定CFU-GM集落数，流式细胞术检 达。 结果： 2．淋巴细胞增殖活性测定：tDCs与tDex对于淋巴细胞均有抑制细胞增殖 的抑制活性更强，提示tDex的抑制活性与时间、剂量成正比。 摘要 3．输注tDCs组、tDex5ug及第3天输注tDex8ug组小鼠较模型组造血功能 明显改善，制模后第28天生存率较模型组高。与模型组比较，外周血白细胞及 血小板数2周后持续上升，单侧股骨骨髓有核细胞数及CFU-GM集落数明显增 多(P0．05)。骨髓病理切片显示：骨髓增生活跃，造血细胞增加，可见少量脂 Foxp3+T细胞明显高于模型组、Thl／Th2辅助性T细胞的比值较模型组明显降低， 降(PO．05)。 结论： 生成耐受性树突状细胞(tDCs)，经超速离心纯化可获得exosome； 2．tDex与tDCs具有相似的诱导免疫耐受特性； 3．来源于体外培养tDCs的tDex输注免疫介导性再生障碍性贫血小鼠体内， 例下降，促进小鼠造血功能的恢复。 关键词：耐受性树突状细胞；免疫耐受；小鼠；再生障碍性贫血；调节性T 细胞 ABSTRACT Objective： Purification ofexosome(tDex)derivedfrom dendritic tolerogenic cells(tDcs)． to the exploreeffectof infusionwith tDexOil