miRNA干扰SGC-7901胃癌细胞株PRL-3表达抑制胃癌腹膜转移的临床和实验与研究.pdf

中山大学博士论文 mJRNA干扰人SGC．7901胃癌细胞株P／比-3田表达抑制胃癌腹膜转移 腹膜转移的临床和实验研究 中山大学附属第一医院胃肠胰外}} 博士研究生：李正荣 导 师：詹文华 教授 摘 要 第一部分PRL-3在胃癌组织中的表达及其与胃癌腹膜转移的关系的研究 目 的 检测促肝细胞再生磷酸酶．3(PRL．?)蛋白在胃癌中的表达，探讨其与胃癌的 侵袭转移及预后的关系。 方法 采用免疫组化的方法检测121例胃癌原发灶，95例淋巴结转移灶及25例 腹膜转移灶只魁．3的表达，分析其表达水平与病理临床资料的关系及其对胃癌 预后的影响。 结果 PRL．3在胃癌原发灶的表达阳性率为71．9％，其中伴淋巴结转移的原发灶 的表达率(77．9％)明显高于无淋巴结转移的原发灶(50．O％)，两者有显著性 中山大学博士论文 miRNA干扰人8GC-7901胃癌细胞株PRI．,-3的表达抑制胃癌腹膜转移 另外，PRL．3的表达与胃癌的淋巴管侵犯、淋巴结转移程度、TNM分期密切相 关，并且与患者的预后呈负相关。在25例胃癌伴腹膜转移患者中原发灶PRL．3 表达的阴性、弱阳性和强阳性的表达分别为6、13和6例，而其相应的腹膜转 移灶分别为3、6和16例(P0．05)。 结论 1．尸J跹．3与胃癌的浸润转移密切相关，并且与患者的预后呈负相关。 2．PRL．3可能在胃癌腹膜转移中起促进作用 方法的建立 目 的 RN,M载体， 通过以鼠nfiR．155为骨架构建针对PRL-3基因的特异性miR 建立有效的RNA干扰方法。并进一步筛选稳定的PRL．3干扰效果的SGC7901 细胞克隆，为进一步的功能实验奠定基础。 方法 的干扰序列。将选择的序列和相应的基因组数据库(人、小鼠、大鼠等)进行 BLAST序列比对，确信所选择的序列与其他的基因不具有同源性。构建以鼠 miR-155为骨架构建针对PRL．3基因的特异性miRRNAi载体，通过用脂质体 lipofectaminc2000分别将特异性miR 和阴性对照 Ⅱ 中山大学博i-lt文 miRNA干扰人SGC-7901胃癌细胞株PRL-3的表达抑制胃癌腹膜转移 Western blot检测PRL-3的mRNA和蛋白的表达变化情况，并确定干扰效果最 佳的序列。用含6pg／ml 基因的特异性miR 水平证实其干扰效果。 结果 1) 21 RNAi载体和阴性 通过用脂质体lipofectamine2000分别将特异性miR mRNA的表达量与对照的 和pCMV—PRL3miRNA·1249表达载体组PRL-3 miRRNAi表达质粒中， 显的变化，在三种构建的PRL．3 pCMV-PRL3miRNA-1249组RNAi效果最好。 3) 和 blot检测表明 pCMV-PRL3miKNA-1249-A1 和 llI 中山大学博士论文 m淑NA干扰人SGC-7901胃癌细胞株PRL-3的表达抑制胃癌腹膜转移 表达比对照的SGC7901细胞