大鼠肝移植急性排斥模型的建立及一些相关与研究.pdfVIP

复旦大学硕上论文 中文摘要 虽然高效免疫抑制剂的应用明显提高了肝移植患者生存率，但急性排斥反 应(AcuteRejection，AR)仍然是肝移植术后最严重的并发症之一，其发生率仍 然高达40％--一60％，因此急性排斥仍然是肝移植研究的重点之一。急性排斥是由 受体效应细胞对供体的同种异体抗原识别后而产生的一个免疫过程，在此过程 中同种异体抗原通过抗原呈递细胞的MHC—II类分子呈递给效应细胞，随者各种 细胞因子分泌受体免疫系统激活。 传统研究认为，Thl／Th2动态平衡和AR的预后相关，在肝移植和肾移植中 Thl功能激活在AR发生前就被观察到，Th2细胞则被证实与移植物耐受相关。 然而最近，随着一个新的细胞系Thl7的发现及对iTreg细胞免疫作用研究的日 益深入，Thl7／iTreg平衡已成为Thl／Th2平衡在移植免疫中的作用的一个重要 补充，然而迄今Thl7和iTreg在移植免疫中的作用尚未完全阐明。 新兴的蛋白组学，是对基因组所编码的所有蛋白质进行研究的学科。通过 蛋白质组学使我们对肝移植急性排斥的发生、发展有了更详尽的理解，并能够 通过发现特异的分子标志物来预测患者预后和治疗效果。 laser 基质辅助激光解吸电离一飞行时间质谱技术(matrixassisted off1 offl desorption，timeight／timeight，massspectrometry， MALDI-TOF／TOFMS)和LTQ是蛋白质组学新兴运用的技术，已有众多的研究组 利用该技术在患者体液中发现了能够早期诊断疾病的标志物；本课题研究希望 通过研究在肝移植术后大鼠血清中寻找与急性排斥相关的分子标记物，并对具 有潜在价值的标记进行调控。 第一部分LEWIS斗BN大鼠肝移植急性排斥模型的建立 本部分研究目的是建立近交系LEWISBN大鼠原位肝移植急性排斥模型，分 析手术成功率的影响因素及该模型的稳定性，并总结该模型区别于常规使用的 SD、Wistar等封闭群大鼠问原位肝移植的特点 结果： 下腔静脉出血(4对)；门静脉结构性错误(3对)；急性肺部损伤，可能与乙 醚过度吸入有关(2对)；尸体解剖未发现明显死亡原因(1对)。 2．供受体体重差异对手术的影响可通过控制体重及调整手术技术改善，抗生素 对术后生存有明显影响。 3．与封闭群大鼠肝移植比较，该模型具有自身特点即在排斥出现的时间、程度 和结果转归上表现并非完全一致，然而所有受体均出现了排斥现象。 4 复旦人学硕士论文 Y 第二部分T-bet+、GATA一3+、RORt+和FoXP3+细胞在大鼠 肝移植术后动态变化的研究 交系LEWIS大鼠做供体，BN大鼠做受体建立肝移植急性排斥模型，并应用Banff 性表达的核转录因子以评估相应的作用。 结果： 1．BN—BN组未出现明显排斥现象，LEW—BN组出现不同程度的排斥，对照组、 轻度排斥组、中度排斥组和重度排斥组各选取5例进行T—bet+、GATA-3+、ROR yt+和FOXP3+细胞检测。 2．T—bet+、GATA一3+、RORyt+和F0xP3+细胞在同种异体移植物中的表达：与 对照组相比，轻度排斥组、中度排斥组和重度排斥组中T-bet+细胞数和ROR y 无明显升高(P值=O．754，双侧)，中度排斥组中明显升高(P值=O．028， 双侧)，重度排斥组显著升高(尸值=0．009，双侧)；轻度排斥组FOXP3+细胞 数无明显升高(P值=0．347，双侧)，中度、重度排斥组显著升高(P值均 0．009，双侧) 3．T—bet+、GATA一3+、RORyt+和FOXP3+细胞在受体脾脏中的表达。 第三部分大鼠肝移植急性排斥血清蛋白质组学研究 本部分研究目的筛选大鼠肝移植术后与急性排斥相关的血清差异蛋白，为 进一步寻找与预后相关的生物标记物提供研究基础。并对有意义的靶蛋白进行 干预，观察干预对大鼠