大鼠内耳高增殖细胞的定量与研究.pdf

摘要 摘要 目的：探讨不同年龄及生长因子对于大鼠内耳高增殖细胞体外增殖的影响。 血清条件下进行单细胞悬浮细胞培养，至第七天，在倒置相差显微镜下对所形 成的细胞球进行计数，对计数结果进行统计学分析；同时描绘出同种器官不同 年龄SD大鼠形成细胞球的数量变化曲线；2．分离取出60只(120耳)出生后 1天SD大鼠各内耳器官：椭圆囊斑，球囊斑和耳蜗Corti器，随机分为对照组 和实验组，对照组不添加任何生长因子，选用上阶段实验数据，实验组分别添 加EGF，bFGF，IGF．1，LIF，进行单细胞悬浮培养，至第八天，在倒置相差显 微镜下进行细胞球计数，对计数结果进行统计学分析；3．免疫荧光染色检测细 胞球的表型特征。 结果：1．P1SD大鼠内耳各个器官单细胞nestin表现为阳性，培养7天后，可 形成悬浮的细胞球，球体细胞免疫荧光表现为nestin和BrdU阳性；2．(1)各个 内耳器官形成的细胞球数量：A．耳蜗Corti器：P1，P7大鼠单个Corti器可形成 细胞球数分别为50-t23个和33+15个，其差异有显著的统计学意义(P0．05)。 而在P14、P21、P30、P60大鼠所取细胞在相同条件下培养，未能观察到有细 胞球形成：B．球囊斑：各个年龄段均观察到有细胞球形成，P1至P60单个球囊 间差异无统计学意义(P0．05)，Pl与其他各年龄段间差异有统计学意义(P 0．05)。C．椭圆囊斑：各个年龄段均观察到有细胞球形成，P1至P60单个椭圆 P7之间差异无统计学意义(P0．05)，P1与其他各年龄段间差异有统计学意义 摘要 无统计学意义(PO．05)。(2)同年龄段单个不同内耳器官所形成细胞球数之间的 统计分析：①P1年龄段：耳蜗Corti器与球囊之间差异有统计学意义(PO．05)， 耳蜗Coai器与椭圆囊之间差异有统计学意义(P0．05)，球囊与椭圆囊之间差 异无统计学意义(P0．05)；P7年龄段：耳蜗Corti器与球囊之间差异有统计学 与椭圆囊之间差异无统计学意义(P0．05)；@P14、P21、P30、P60年龄段： 大鼠的球囊斑和椭圆囊斑之间差异无统计学意义(PO．05)。3．添加了生长因 子EGF、bFGF、IGF．1后，单个椭圆囊斑、球囊斑和耳蜗Corti器进行细胞培 养，所形成的细胞球数量明显增多，与对照组比较，差异有显著统计学意义， 而三组之间无差异；添加LIF组则球团数量增多不明显，与对照组比较提示差 异无统计学意义。 结论1．大鼠内耳前庭器官(球囊斑，椭圆囊斑)以及耳蜗(Corti器)内有高 增殖能力细胞，能表达神经干细胞的特性；但随着鼠龄的增长，这种增殖能力 总体趋势表现为减退；2．与前庭器官比较，耳蜗内高增殖细胞的增殖能力减退 更快，但出生后1天的大鼠耳蜗内高增殖细胞的增殖能力更强，出生后14天大 鼠耳蜗内未能发现高增殖细胞，同时还发现。前庭器官内高增殖细胞的增殖能 力下降缓慢，持续至出生后60天仍可见高增殖细胞，球囊斑高增殖细胞减少主 要集中在出生后第1天至21天，而椭圆囊斑高增殖细胞减少主要集中在出生后 第1天至30天。除外出生后21天的大鼠，其他同年龄段两种前庭器官内高增 殖细胞的增殖能力无差异；3．EGF、bFGF、IGF．1这三种生长因子均可单独促 进出生后l天大鼠内耳高增殖细胞的增殖能力，但三者之间促增殖作用无差异， 而LIF的促增殖作用不明显。 关键词：年龄；球囊斑；椭圆囊斑；耳蜗；Corti器；高增殖细胞；生长因子 Abstract ABSTRACT theinfluenceonthe of cells high investigate proliferationproliferative Objettive：To and factorsinvitro． fromtheinnerearofSDrats different by ages growth