黄芪多糖对尿路细胞免疫功能的调节作用与研究.pdf

中文摘要 英文摘要 研究论文 —1L—jL． 刖舌 材料 结果 附图 附表 讨论 结论 参考 综述黄 致谢… 个人简历 中文摘要 黄芪多糖对尿路细胞免疫功能的调节作用研究 摘 要 tract 目的：尿路感染(Urinary 病之一，女性较为多见。其已成为慢性肾功能不全的主要病因。然而，近 年来由于抗生素耐药的逐年增加，感染菌在尿路细胞内的长期定居以及机 体尿路免疫失衡等原因严重影响了单一抗生素治疗的效果，临床治疗出现 了困境，也增加了患者的身心痛苦。因此，寻找并开发抗生素以外的治疗 方案，是应对UTI的新策略。 尿路固有免疫是机体预防病原菌侵入的重要屏障，起着抵抗微生物的 防御作用。TLR4在尿路细胞固有性免疫中扮演重要角色，其在尿路主要 表达于膀胱上皮细胞和肾小管上皮细胞。TLR4与其配体结合后，可以通 细胞因子的表达，发挥抵抗细菌入侵，促进细菌排出等固有性免疫作用。 前期的临床调查研究已发现中药黄芪能够通过上调慢性尿路感染患 者TLR4的表达提高机体的免疫能力，提高治疗效果。而黄芪是多种化学 成分的混合物，黄芪多糖(Astragalus 分，也是TLR4的配体，其是否能够通过TLR4调节尿路粘膜免疫功能的 研究还鲜有报道。 本研究旨在将黄芪多糖作用于膀胱上皮细胞株5637细胞、肾小管上 皮细胞株A498、人单核细胞型淋巴瘤n口．1细胞及小鼠后，探索黄芪多 糖对尿路细胞TLR4表达、细胞因子的分泌、抗菌效应、与LPS的竞争 作用以及小鼠膀胱炎症反应强度的影响，进一步研究黄芪多糖调节尿路粘 膜免疫功能的机制，为尿路感染的免疫调节、治疗提供实验依据。 方法： 1 TLR4表达的检测：将不同浓度的黄芪多糖及黄芪多糖与LPS的混 胞，流式细胞仪检测细胞表面TLR4的表达； 25637细胞的抗侵袭作用：不同浓度的黄芪多糖及黄芪多糖与LPS 的混合物刺激5637细胞48小时后，加入大肠杆菌U30共培养l小时， 中文摘要 彻底洗去未侵入细胞的大肠杆菌，将侵入细菌的细胞用O．5％的 TritonX．100溶解，溶解液稀释后LB平板培养过夜，进行菌落计数； 3实时定量PCR检测细胞因子的表达：黄芪多糖作用于5637细胞、 A498细胞、THP．1细胞，以及感染模型小鼠膀胱和肾组织，提取总RNA， 表达。 4动物实验：8周龄Balb／C雌鼠随机分为2组，对照组和实验组， 后，对照组，腹腔注射生理盐水，1009l／只；实验组，腹腔注射黄芪多糖 注射液，每只200mg／kg，每天一次，共注射3天。 溶解，溶解液稀释后涂布于固体LB平板培养基，37℃温箱孵育过夜，进 行菌落计数。 6制作感染小鼠膀胱、肾组织切片，HE染色，光学显微镜观察炎症 ’细胞浸润现象。 结果： 时后，与对照组相比，也能显著刺激两种细胞TLR4表达上调(PO．05)。 2 细胞48小时后，U30细菌感染细胞，细胞内侵入的细菌数分别为 70．454-15．5，82．734-38．25，显著低于空白对照组234．94-1 15，(PO．05)，不 LPS共同作用5637细胞，细胞内细菌数也显著 同浓度的APS与2¨∥ml 数呈下降趋势。