新型荧光探针分子制备及在液相色谱和电泳中应用.pdf

摘 要 液相色谱及电泳的分离分析被广泛应用于诸多领域，如生物学、化学、 毒物学、临床化学、以及环境科学等。液相色谱是分析化学中发展最快、应 用最为广泛的分析手段，其分离特性使之成为诸多领域中被广泛采用的一种 有效的分离手段。继液相色谱之后，毛细管电泳也是一种近年来迅速发展的 分离技术，它具有高效、快速、样品用量少等特点。能用于多种化合物的分 离，如氨基酸、手性药物、维生素、杀虫剂、无机离子、有机酸、染料、肽 和蛋白、甚至整个细胞和病毒颗粒。 毛细管电泳的分离机制与液相色谱不同，故两者之间可以提供正交的、 互补分析，此外，电泳的方法开发较为简单，不仅样品用量很少，而且几乎 没有有机废液。 随着现代分析技术的发展，人们对化合物的常规分析已转向痕量及超痕 量分析。为了提高检测灵敏度，人们在放大信号和改进检测仪器方面进行着 不懈的努力，如何使所测结果更加可靠和灵敏是所有科学工作者优先期盼 的，但是在提高仪器灵敏度方面受到一定的限制，因此研制并开发新型高灵 敏的荧光探针分子，提高检测灵敏度是一个行之有效的途径，也为克服常规 的化学分析方法无法解决的困难开辟了新途径，使许多经典方法得以改进， 使进行痕量和超痕量分析成为现实。为此，本研究采用化学衍生化方法，改 变被测化合物特性，使之用于液相色谱和电泳的快速高灵敏的测定。论文中 设计并合成了两种新型荧光探针分子，应用于氨基酸和多肽的高效液相色谱 和毛细管电泳的分离分析，结果令人满意。论文分四章： 第一章： 对化学衍生化试剂及衍生化方法进行了简单介绍。对高效液相色谱和毛 细管电泳的发展和相关基础知识进行了简述。综述了荧光试剂在氨基酸和多 肽的高效液相色谱和毛细管电泳中的分离应用。 第二章： 两种新型荧光试剂咔唑一9一乙基氯甲酸酯和1，2-苯并一3，4～二氢咔唑 9一乙基氯甲酸酯的合成及结构表征。 第三章： 咔哗一9一乙基氯甲酸酯在高效液相色谱和毛细管电泳中的应用，包括 四部分。 3．1研究了咔降一9一乙基氯甲酸酯用于氨基酸和多脓的高效液相色谱 分离分析。选择了衍生化条件，优化了洗脱程序，考察了氨基酸和 多肽衍生物的检测限、线性范围及回归方程。结果表明，在实验条件 下，氨基酸衍生物的线性范围宽，检测限达fmol，灵敏度高。在实 际应用中测定了四种苔藓中的氨基酸含量，结果令人满意。 3．2研究了咔唑一9一乙基氯甲酸酯用于氨基酸的毛细管区带电泳分离。 通过对分离条件的考察，找到最佳的分离条件：18mmol／L的醋酸 盐缓冲溶液(含28％的乙腈)，pH值为5．8，分离电压25kV，温度 为25。C。在选定的分离条件下，12种氨基酸衍生物在不足15rain 内实现了基线分离，结果理想。 3．3采用毛细管胶束电动色谱在6min内实现了CEOC衍生的14种氨基 酸衍生物的完全分离。通过对分离条件的选择，得出了最佳的分离 条件：分离电压为25kV、柱温25℃、235nmDAD检测，采用硼酸 盐浓度为36mmol／L，含有30mmol／LSDS和3％乙腈的缓冲溶液 (pH：9．0)。考察了各种氨基酸的线性范围、检测限及回归方程， 从而为CEOC作衍生试剂，利用毛细管电泳对其它环境样品中的氨 基酸的分离测定奠定了基础。 3．4采用毛细管电泳在胶束电动色谱模式下实现了小肽CEOC衍生物的 完全基线分离。通过电泳条件的选择，得出最佳分离条件：分离电 30mmol／L和3％的乙腈，235nmDAD检测。在选定的条件下，考察 了5种肽的线性、检测限和方法的重现性，结果表明，所建立的方 法简单快速， 第四章： 研究了l，2一苯并3，4-二氢咔唑一9一乙基氯甲酸酯在高效液相色谱和毛 细管电泳中的应用，包括三部分。 4．1研究了1，2-苯并一3，4一二氢咔唑一9～乙基氯甲酸酯用于氨基酸和多 肽的高效液相色谱分离分析。选择了衍生化条件，优化了洗脱程序， 考察了氨基酸和多肽衍生物的检测限、线性范围及回归方程。比较 了BCEOC和CEOC衍生物的荧光强度。结果表明，在实验条件下， 氨基酸和多肽衍生物的