色谱分离法.pptVIP

* * 色谱分离法 薄层色谱 柱色谱 纸色谱 实验内容： 色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该物质时进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。 流动的混合物溶液称为流动相；固定的物质称为固定相（可以是固体或液体）。根据组分在固定相中的作用原理不同，可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、排阻色谱等；根据操作条件不同，可分为柱色谱、纸色谱、薄层色谱、气相色谱及高效液相色谱等类型。 返回 固定相（吸附剂）的要求： 具有较大的表面积和一定的吸附能力 与流动相及试液中各组分不发生化学反应，并不溶于流动相 应粒度均匀，颗粒细小 常见官能团的极性 常用流动相的极性 薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示，又称薄层层析，属于固－液吸附色谱。是近年来发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点。 它展开时间短（几十分钟就能达到分离目的），分离效率高（可达到300-400块理论塔板数）。一方面适用于小量样品（几到几十微克，甚至0.01μg）的分离；另一方面若在制作薄层板时，把吸附层加厚，将样品点成一条线，则可分离多达500mg的样品。因此又可用来精制样品。 薄层色谱是在被洗涤干净的玻板（10×3cm左右）上均匀的涂一层吸附剂或支持剂，待干燥、活化后将样品溶液用管口平整的毛细管滴加于离薄层板一端约1cm处的起点线上，凉干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的展开槽内，浸入深度为0.5cm。待展开剂前沿离顶端约1cm附近时，将色谱板取出，干燥后喷以显色剂，或在紫外灯下显色。记下原点至主斑点中心及展开剂前沿的距离，计算比移值（Rf）： 良好的分离，Rf 值应在0.15-0.75之间 1、定性分析物质。（通过与已知标准物对比的方法进行未知物 的鉴定，检验物质是否纯净） 2、快速分离少量物质。 （几到几十微克，甚至0.01μg） 3、跟踪反应进程。在进行化学反应时，常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失，来判断反应是否完成。 4、用薄层色谱法确定柱色谱的淋洗剂。 薄层色谱的用途： 此法特别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。 薄层色谱 吸附剂的选择 薄层板的制作 展开剂的选择 点样与展开 显色 实验关键步骤： 定性与定量 吸附剂的选择 薄层色谱用的吸附剂和支持剂：薄层吸附色谱的吸附剂最常用的是氧化铝和硅胶；分配色谱的支持剂为硅藻土和纤维素。 其颗粒大小一般为260目以上。颗粒太大，展开剂移动速度快，分离效果不好；反之，颗粒太小，溶剂移动太慢，斑点不集中，效果也不理想。 吸附剂的活性与其含水量有关，含水量越低，活性越高。 化合物的吸附能力与分子极性有关，分子极性越强，吸附能力越大。 化合物的吸附性与它们的极性成正比，化合物分子中含有极性较大的基团时，吸附性也较强，各种化合物对氧化铝的吸附性按以下次序递减： 酸和碱 醇、胺、硫醇 酯、醛、酮 芳香族化合物 卤代物、醚 烯 饱和烃 硅胶：常用吸附剂。 氧化铝：用于非极性化合物的分离，根据制备时的PH不同，又分为碱性、中性和酸性。 聚酰胺；分离易生成氢键的极性化合物。 纤维素：极性有机化合物及金属阳离子、阴离子分离。 吸附剂的选择 薄层板制备的好坏直接影响色谱的结果。薄层应尽量均匀且厚度（0.25—1mm）要固定。否则，在展开时前沿不齐，色谱结果也不易重复。 （1）平铺法：用薄层涂布器涂布，它适合于科研工作中数量较大要求较高的需要 （2）浸渍法：把两块干净的玻片叠合，浸入调制好的吸附剂浆料中，取出后分开、凉干。 （3）简易平铺法（倾注法）：将配制好的浆料倾注到清洁干燥的载玻片上，拿在手中轻轻的左右摇晃，使其表面均匀平滑，在室温下凉干后进行活化。 本实验用此法制备薄层板6片：吸附剂为硅胶G（ 4g ），用0.5%的羧甲基纤维素钠水溶液（8-10ml ）调成浆料。 薄层板的制作 薄层板的活化 将涂布好的薄层板置于室温凉干后，放在烘箱内加热活化，活化条件根据需要而定。 硅胶板一般在烘箱中渐渐升温，维持105—110℃活化30min。。 氧化铝板在200℃烘4h可得到活性为Ⅱ级的薄板，在150—160℃烘4h可得活性为Ⅲ—Ⅳ级的薄板。 展开剂的选择 薄层色谱展开剂的选择，主要根据样品的极