人表皮光老化相关蛋白的蛋白质组分析与鉴定.pdf

重庆医科大学学报2010年第35卷第 3期 (JournalofChongqingMedicalUniversity2010．Vo1．35No．3) 一 385 一 技术与方法 文章编号：0253—3626(2010)03．．-0385一-04 人表皮光老化相关蛋白的蛋白质组分析与鉴定 李文静，李 惠，黄 欣，陈爱军，龙 亭 (重庆医科大学附属第一医院皮肤科重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心，重庆 400016) 摘【 要】目的：以老年人正常皮肤为研究对象，分析曝光部位及非曝光部位的表皮差异蛋白，筛选出表皮细胞中与皮肤光化相 关的蛋白。方法：从分离所得的不同部位老年人表皮中提取蛋白质，并进行 2一DE分离，PDQUEST软件分析凝胶上差异蛋白点， 进一步采用MALDI—TOF质谱分析及数据库查询 ，鉴定差异表达蛋 白；并在蛋白质水平进行 Western—blotting验证差异候选蛋 白。结果：通过分析比较两组表皮双向电泳图谱，确定了15个差异蛋白点，经 MALDI-．-TOF分析及数据库查询，成功鉴定了其中 5个差异表达蛋白，发现热休克蛋白B1(HeatshockproteinB1，HSPB1)、膜联蛋白A2(AnnexinA2，ANXA2)、角蛋白80(Keraftn， typeⅡeytoskeletal80，K2C80)、丝裂原激活的蛋白激酶 3(Mitogen-一activatedproteinkinase3，MK03)在老年人曝光部位的表皮中 高表达，而谷胱甘肽S转移酶A2(GlutathioneS-transferaseA2，GSTA2)在非曝光部位表皮中高表达。结论：老年人正常皮肤曝光 部位和非曝光部位的表皮存在差异蛋白，经分析和鉴定的5种蛋白质与皮肤的光老化有密切的关系，为进一步研究表皮细胞在 光老化过程中的作用及分子机制奠定基础。 【关键词】光老化；表皮 ；蛋白质组 【中国图书分类法分类号】R758．1 【文献标识码】A 【收稿 日期】2009—10-一27 Analysisandidentificationofhumanepidermalproteinsassociatedwith photoaging LIWen,-．jing，etall (DepartmentofDermatology，theFirstAffiliatedHosphal，ChongqingMedicalUniversity) A【bstract]Objective：Thisstudyistoanalyzethedifferentialproteinsexpressedinthenormalelderlyexposedepidermisandthe non—exposedepidermis．Methods：Theproteinswereextractedfrom hteexposedandnon一-exposedelderlyseparatedepide rmis，andwere submittedtotwo--dimensionalgeleleetrophoresis．．ThentheirdectrophoretiepatternswereanalyzedbyhtePDQUESTsoftwareand identifiedbyMALDI-一-TOFMS．ThefollowingstepsweredatabasequeryandprobationusingWestern-blotting．Results：Bycomparisonhte twogroupsoftwo—dimensional electrophoresispatterns，15differentialproteinspotsweredetermined，inwhich5differentialproteinspots weresuccessfullyidentifiedbyMALDI-TOFanalysisanddatabasequeries，and4proteins，HeatshockproteinB1