隐孢子虫鼠基因型糖蛋白GP900下段基因的克隆和鉴定.pdfVIP

第44卷 第2期 哈尔滨医科大学学报 Vo1．44．No．2 114 2010年4月 JOURNALOFHARBINMEDICALUNIVERSITY Apr．，2010 隐孢子虫 鼠基因型糖蛋 白GP900 下段基因的克隆和鉴定 张唯哲，杨凤坤，刘爱芹，施 倩，曲峻锋，凌 虹 (哈尔滨医科大学寄生虫学教研室，黑龙江 哈尔滨 150081) [摘要] 目的 构建隐孢子虫鼠基因型糖蛋白GP900下段基因的克隆载体。方法 采用巢式PCR方法扩增 目的 基因片段GP900下段，PCR产物纯化后，将 目的片段与载体连接，将连接产物转化到大肠杆菌JM109感受态细胞 中，对所得菌落进行阳性克隆的筛选，鉴定阳性结果后进行基因测序。结果 成功构建 GP900下段基因的克隆载 体。结论 GP900F段基因克隆载体的构建为下一步表达GP900、研究 GP900蛋 白功能及其在隐孢子虫侵入靶细 胞中的作用、研制疫苗奠定了基础。 [关键词] 隐孢子虫鼠基因型；糖蛋白GP900；克隆 [中图分类号]R382．3 [文献标识码]A [文章编号]1000—1905(2010)02—0114—03 Cloningandidentificationofdownsegmentgeneofglycoprotein GPg00ofCryptosporidium mousegenetype ZHANG Wei—zhe，YANG Feng—kun，LIU Ai—qin，etal (DepartmentofParasitology，HarbinMedicalUniversity，Harbin150081China) Abstract：Objective ToconstructclonalvectorofdownsegmentgeneofglycoproteinGPg00ofCrypto— sporidium mousegenetype．M ethods Thedown segmentgeneofglycoprotein GPg00wasampliedby PCR，aftertheproductionofPCRwaspurified，theaim segmentandvectorwereconnected，soonafterit wastransformedintocompetentcellJM109．Whenthemascclinecolonywasscreened，itwasidentified byPCR．Thenitwassendtocompanytosequence．Results Theclonalvectorofdownsegmentgeneof glycoproteinGP900 ofCryptosporidium mousegenetypewassuccessfullyconstructed．Conclusion The presentresultsarethebasisforfurtherexpressingtheGPg00，investigatingthefunctionsoftheGPg00 anditsroleintheentrytargetcellsaswellasstudyingvaccine． Keywords：Cryptosporidium mousegenetype；glycoproteinGPg00；clone 隐孢子虫(Cr)ptosporidium)为胃肠道上皮细胞 疗和预防措施 。目前 已经确定了几种候选分子， 内寄生原虫，广泛存在于家畜和野生动物等至少 如：环子孢子样糖蛋 白外抗原 (CSL)、糖蛋白gpl5／ 170多种动物巾，亦为人体重要寄生虫，是人和幼畜 glM5、糖蛋白gp／23、糖蛋 白GP900等。GPg00位于 腹泻的重要病原体，可引起隐孢子