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槟榔碱对胎鼠外周血细胞DNA的影响 　　【摘要】目的通过检测槟榔碱对胎鼠外周血细胞DNA损伤的程度和观察胎鼠生长发育情况，探讨槟榔碱对小鼠胚胎毒性的影响。方法使用槟榔碱给雌鼠灌胃6—8周后，与雄鼠合笼，孕16d后各组随机取孕鼠6只，剖腹取胎鼠，检测各组胎鼠的外周血细胞DNA损伤情况，并进行分析。孕19d后处死各组孕鼠，检测胎鼠的生长发育情况以及各组胎鼠的畸形发生率。结果正常的对照组胎鼠外周血细胞DNA出现典型的原型，而实验组的胎鼠外周血细胞DNA出现特征性的彗星形态。于孕19d处死各组动物，发现实验组动物胎鼠的生长发育指标包括身长、体重、尾长小于对照组，畸形发生率高于对照组。结论槟榔碱能对胎鼠外周血DNA造成一定程度的损伤，并对胎鼠各项生长发育指标均有影响，推测槟榔碱对胚胎产生一定毒性影响。 　　关键词：槟榔碱DNA损伤胎鼠生长发育 　　1引言 　　全世界约有6亿槟榔嗜好者，而且近年来嚼食人数还有增加趋势。槟榔碱是从天然棕榈科植物槟榔的种子中提取的一种胺类生物碱，槟榔的化学成分复杂，而槟榔碱是槟榔的主要成分,有一定毒性。关于槟榔碱的毒理学作用已有许多报道，以往的研究表明，槟榔碱对小鼠骨髓细胞的DNA有一定的损伤作用,具有一定的遗传毒性，对胚胎发育具有延迟作用。但对于槟榔碱对是否会对孕鼠产生一定毒性反应，是否会通过孕鼠影响到胎鼠的相关报道很少，而生殖毒性却是在如今越来越受到人们的关注。本文旨在探讨槟榔碱对小鼠妊娠毒性和胎鼠外周血细胞DNA的影响。 　　2实验材料 　　2.1实验小鼠 　　6—8周龄雌性昆明小鼠，购于湖南农业大学实验动物中心。 　　2.2仪器 　　电泳仪：北京君意东方电泳有限公司 　　荧光倒置显微镜：日本OLYMPUS公司 　　2.3主要试剂 　　氢溴酸槟榔碱(arecolinehydrobromide,AREC),购自Sigma公司 　　彗星实验试剂盒：购于普洛麦格（北京）生物技术有限公司 　　SCGE碱性电泳缓冲液（pH13.0）：NaOH12g，EDTA0.37224g，加ddH2O定容至1000ml。 　　SCGE中和液（Ph7.5）：Tris48.5g，加ddH2O定容至1000ml。 　　3实验方法 　　3.1小鼠妊娠毒性模型的建立 　　健康雌性昆明小鼠共45只，体重25g左右，未经产，鼠龄6—8周龄。随机分为3组，每组15只，第1组为空白对照组，第2实验对照组，第3组为实验组。实验组用槟榔碱灌胃（AREC，40mg/kg），1次/d，连续6—8周，实验对照组同对照组以相同的剂量和方式给小鼠灌生理盐水，空白对照组不做任何处理。连续灌胃6周后与正常雄鼠2：1合笼，次日检查阴栓，阳性者定为受孕0.5d。设空白对照为Control组、连续6周生理盐水灌胃为W6P-组、连续6周槟榔碱灌胃为W6P+组。 　　3.2碱性单细胞凝胶电泳(SCGE)检测槟榔碱对胎鼠外周血细胞DNA的损伤孕16d后各组随机取6只孕鼠，剖腹取胎鼠，每胎取胎鼠6只，断头取全血，严格按照彗星实验试剂盒说明书制作切片。在荧光显微镜下观察实验结果，激发光为波长540nm的绿光，得到黑色背景，红色DNA彗星图像，拍照。选用彗星细胞发生率（%）和迁移距离判断外周血细胞DNA损伤及其损伤程度。 　　3.3各组胎鼠生长发育指标和畸形发生率 　　各组余下孕鼠19d后剖腹取胎鼠，统计Control、W6P-、W6P+各组妊娠小鼠的胎鼠的畸形发生率和生长发育指标，采用SPSS18.0统计软件t检验，P0.05为差异具有统计学意义。 　　4实验结果 　　4.1胎鼠外周血细胞DNA损伤 　　表1显示：在本实验条件下，用目镜测微尺直接测量细胞迁移距离。实验组W6P+组细胞迁移距离与彗星发生率均[(28.20±5.6)μm，31%](图5-6)，W6P-[（5.14±0.7）μm,2%],明显高于Control组[(4.95±1.3)，μm,2％]，差异有统计意义，P0.05。而W6P-组和Control组，P0.05，无统计学意义。 　　表1胎鼠外周血细胞DNA损伤 　　注：a:与Control组比较，P0.05,b:与Control比较，P0.05,c:与W6P-比较，P0.05 　　4.2胎鼠生长发育指标和畸形发生率 　　由表2可见，W6P+组胎鼠畸形发生率高于W6P-组和Control组，且W6P+组胎鼠的总数、体重、身长和尾长均明显低于W6P-组和Control组，表明槟榔碱在孕鼠妊娠期对胚胎产生了一定的毒性作用，使胎鼠的生长发育受到影响。 　　5讨论 　　生殖毒性指对雄性和雌性生殖功能或能力的损害和对后代的有害影响。生殖毒性即可发生于妊娠期，也可发生于妊娠前期和哺乳期。生殖发育毒物或其他环境因素与机体接触后,可干扰生殖发育任何环节,并且造成损伤作用。槟榔的