双向用户试剂准备.docVIP

用户需准备如下器材及溶液 确定电源接地 操作环境：15–30 °C ±2 °C 操作环境湿度要求：相对湿度0–70%* 如果使用启动试剂盒，绿色标注不需要准备 大量筒或烧杯 ( 1L, 500ml,250ml,50ml) 离心管1.5ml 5ml若干 去离子水或MilliqQ水 滤纸10张 摇床 天平 染色盒 手套 移液器及枪头 样品（要求尽可能除盐） 胶条平衡缓冲液母液 尿素 6M 36g SDS 2% 2g Tris-HCl 0.375M pH8.8 25ml（1.5M pH8.8 Tris-HCl） 甘油 20% 20ml MilliQ水 定容至100ml 分装成10管，每管10ml，-20℃冰箱保存。 胶条平衡缓冲液I 胶条平衡缓冲液母液 10ml DTT 0.2g 充分混匀，用时现配。 胶条平衡缓冲液II 胶条平衡缓冲液母液 10ml 碘乙酰胺 0.25g 充分混匀，用时现配。 水化上样缓冲液任选一种 水化上样缓冲液（I） 尿素 8M 4.805g CHAPS 4% 0.4g DTT 65mM 0.098g（现加） Bio-Lyte 0.2%(w/v) 50(l（40%）（现加） 溴酚蓝 0.001% 10(l（1% 溴酚蓝） MilliQ水 定容至10ml 分装成10小管，每小管1ml，-20℃冰箱保存。 水化上样缓冲液（II） 尿素 7M 4.2g 硫脲 2M 1.52g CHAPS 4% 0.4g DTT 65mM 0.098g（现加） Bio-Lyte 0.2%(w/v) 50(l（40%）（现加） 溴酚蓝 0.001% 10(l（1% 溴酚蓝） MilliQ水 定容至10ml 分装成10小管，每小管1ml，-20℃冰箱保存。 水化上样缓冲液（III） 尿素 5M 3.0g 硫脲 2M 1.52g CHAPS 2% 0.2g SB 3-10 2% 0.2g DTT 65mM 0.098g（现加） Bio-Lyte 0.2%(w/v) 50(l（40%）（现加） 溴酚蓝 0.001% 10(l（1% 溴酚蓝） MilliQ水 定容至10ml 分装成10小管，每小管1ml，-20℃冰箱保存。 低熔点琼脂糖封胶液 低熔点琼脂糖 0.5% 0.5g Tris 25mM 0.303g 甘氨酸 192mM 1.44g SDS 0.1% 1ml（10% SDS） 溴酚蓝 0.001% 100(l（1%溴酚蓝） MilliQ水 定容至100ml 加热溶解至澄清，室温保存。 30% 聚丙烯酰胺贮液 丙烯酰胺 150g 甲叉双丙烯酰胺 4g MilliQ水 500ml 滤纸过滤后，棕色瓶4℃冰箱保存。 1.5mol/L Tris碱 pH8.8 Tris碱 90.75g MilliQ水 400ml 用1mol/L HCl调pH至8.8，加MilliQ水定容至500ml。4℃冰箱保存。 0.5mol/L Tris碱 pH6.8 Tris碱 12g MilliQ水 120ml 用1mol/L HCl调pH至6.8，加MilliQ水定容至200ml。4℃冰箱保存。 10% SDS SDS 10g MilliQ水 100ml 混匀后，室温保存。 10% Ap Ap 0.1g MilliQ水 1ml（用时加水溶解） 溶解后，4℃冰箱保存。 TEMED 10×电泳缓冲液 （1×= 25mM Tris，192mM glycine，0.1% SDS，pH8.3） Tris碱 30g 甘氨酸 144g SDS 10g MilliQ水 1L 混匀后，室温保存。 水饱和正丁醇 矿物油