安心颗粒对心衰大鼠血清TNFα、IL6及心肌细胞凋亡的影响_药学论文.docVIP

安心颗粒对心衰大鼠血清TNF、IL及心肌细胞凋亡的影响_药学论文 安心颗粒对心衰大鼠血清TNF、IL及心肌细胞凋亡的影响_药学论文 【摘要】 　　【目的】观察安心颗粒对慢性心力衰竭（CHF）模型大鼠血清肿瘤坏死因子（TNF）、白细胞介素（IL）水平及心肌细胞凋亡的影响。【方法】将50只雌性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、卡托普利组、安心颗粒低剂量组和安心颗粒高剂量组。采用阿霉素腹腔注射造模，每周1次，连续6周。造模同时，卡托普利组及安心颗粒低、高剂量组分别按６.２５mg·kg-1·d-1、0.8g·kg-1·d-1、1.6g·kg-1·d-1剂量灌胃给药。造模结束后,分别测定各组血清TNF、IL水平与心肌细胞凋亡指数（Ｉ凋亡）。【结果】 模型组血清TNF、IL水平及Ｉ凋亡均显著性升高（Ｐ＜０.０５）；安心颗粒低、高剂量组均可显著性降低模型大鼠血清ＴＮＦ、ＩＬ６水平及Ｉ凋亡（Ｐ＜０.０５或Ｐ＜０.０１），且呈现一定剂量效应关系。【结论】安心颗粒可通过调控炎性细胞因子,抑制心肌细胞凋亡,阻止心力衰竭的发展。 【关键词】 安心颗粒／药理学 心力衰竭 慢性／中药疗法 细胞凋亡 细胞因子 心肌／病理学 疾病模型 动物 大鼠 　　研究表明心力衰竭时有广泛的心肌细胞凋亡存在,心肌细胞凋亡发生参与了心力衰竭的心肌重塑,并在心力衰竭的发生、发展中起重要作用［1］。炎症细胞因子可诱导心肌细胞凋亡、促进心肌重构而促使心力衰竭恶化［2］。因此，以抑制炎性细胞因子和心肌细胞凋亡为靶向的生物学干预，是治疗心力衰竭的一个有效途径。本文旨在通过建立阿霉素性心力衰竭大鼠模型，探讨肿瘤坏死因子（TNF）、白细胞介素（IL）与细胞凋亡的关系及中药安心颗粒的作用机制。现将结果报道如下。 　　1 材料和方法 　　1.1 药物与试剂 安心颗粒（由人参、桂枝、瓜蒌壳、水蛭、茯苓等组成，含生药4.5g/g）由培力（南宁）药业有限公司提供（批号：050301）；卡托普利由中美上海施贵宝制药有限公司生产（批号：0505031）；盐酸阿霉素粉针由深圳万乐药业有限公司生产（批号：0501E2）。TNF、IL试剂盒购于北京Solarbio公司；原位细胞凋亡试剂盒由Roch公司生产。 　　1.2 动物 清洁级雌性SD大鼠50只，体质量160～180g，由广西中医学院实验动物中心提供（合格证号为桂医动字11003）。 　　1.3 模型复制［３］ 将注射用盐酸阿霉素粉针用灭菌注射用水溶解，用9g/L生理盐水配成0.8mg/mL溶液，第1～3周按3mg/kg剂量给模型组和用药组大鼠进行腹腔注射，第4～6周再按2mg/kg剂量进行腹腔注射，正常对照组大鼠注射等容积的生理盐水，均每周1次，连续6周。以出现心力衰竭病理改变为造模成功。 　　1.4 分组及给药 大鼠在用基础饲料适应性喂养1周后，随机分为正常对照组、模型组、卡托普利组、安心颗粒低剂量组、安心颗粒高剂量组，每组10只，分笼饲养。造模同时，卡托普利组以6.25mg/kg剂量灌胃，安心颗粒低、高剂量组分别按0.8g/kg和1.6g/kg剂量灌胃，用药剂量按动物体表面积换算。正常对照组予等容积蒸馏水灌胃。每日1次，自由饮食。 　　1.5 细胞因子及心肌细胞凋亡检测 末次给药24h，取大鼠主动脉血5mL，分离血清，然后用颈椎脱臼法处死大鼠，剖胸取出心脏，洗净后切取部分左心室组织，用40g/L多聚甲醛液固定12h，梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片进行形态学观察。血清细胞因子TNFα、IL6检测：采用双抗体夹心酶联免疫吸附（ELISA）法，严格按试剂盒说明操作。心肌细胞凋亡检测：采用TUNEL法，按试剂盒说明操作，以细胞核被染成棕褐色为阳性结果。每个标本观察5张切片，每张切片随机选取5个高倍视野（×400）中的凋亡阳性细胞，计算平均阳性细胞百分数。按公式计算凋亡指数：Ｉ凋亡=n凋亡细胞核/n总细胞核。 　　1.6 统计学方法 采用SPSS 12.0统计软件进行统计分析。 　　2 结果 　　2.1 各组大鼠心肌病理形态学观察 光镜下观察心肌组织切片，正常对照组大鼠可见心肌形态正常，胞浆纹理清晰。其他各组可见程度不同的肥大心肌细胞群，细胞排列紊乱，断裂、溶解、炎性细胞浸润，卡托普利组及安心颗粒低、高剂量组较模型组改变较轻。模型组还可见肺泡壁破裂、融合、水肿、淤血改变，且肝组织苏木素-伊红（HE）染色可见肝窦扩张淤血，提示心衰模型制备成功。结果见图1。 　　2.2 各组大鼠血清TNFα、IL6及心肌细胞凋亡指数比较 在造模过程中，模型组有3只，卡托普利组及安心颗粒低、高剂量组各有2只大鼠死于心力衰竭，正常对照组有1只因灌胃不当死亡。表1结果显示：模型组血清ＴＮＦα、ＩＬ６水平及Ｉ凋亡均显著性升高（Ｐ＜０.０５），安心颗粒