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小柴胡汤超微饮片与常规饮片化学成分溶出特性的对比研究_药学论文 小柴胡汤超微饮片与常规饮片化学成分溶出特性的对比研究_药学论文 作者：张祥伟，罗奇志，伍彪，卓仁恭，戴开金，黄添友，佟丽 【摘要】 目的对比研究小柴胡汤超微饮片与常规饮片化学成分溶出量及溶出速度的变化，为中药复方超微饮片临床应用提供科学依据。方法 考察浸泡（或煎煮）时间、溶剂量对两种饮片化学成分溶出量的影响；分别采用紫外分光光度法和高效液相色谱法(HPLC)测定两种饮片中总黄酮及黄芩苷的含量。结果在相同条件下，超微饮片水溶性成分、总黄酮及黄芩苷溶出量均明显高于常规饮片（0.01）；总黄酮及黄芩苷的溶出速度加快（0.05）。结论小柴胡汤经超微粉碎后，其水溶性成分、总黄酮及黄芩苷的溶出量显著提高，有效成分溶出速度增加。 【关键词】 小柴胡汤； 超微饮片； 总黄酮； 黄芩苷 在中医临床上，中药常规饮片是组成中药复方汤剂的常用饮片之一,为医生的辨证论治提供了方便的中药及剂量变换方式，但由于汤剂的使用量较大，患者需要花费一定的时间煎煮药材，造成药材资源、能源及时间的极大浪费。近年来,迅速发展起来的超微粉碎技术已用于中药饮片的加工，可将常规饮片进行微米级超细化，破碎细胞壁，比表面积增大,使药物成分的释放速度和释放量大大增加［1～3］。有关单味中药的超微饮片化学成分溶出度方面的研究已有很多报道，但中药复方超微饮片的研究相对较少。本项研究探讨张仲景名方小柴胡汤超微饮片与常规饮片水溶性成分、总黄酮溶出量及指标成分黄芩苷含量及溶出速度的变化,旨在为中药超微饮片临床应用提供科学依据。 　　1 材料与仪器 　　1.1 药品及试剂 　　小柴胡汤 (柴胡24 g，黄芩9 g，党参9 g，大枣9 g，半夏9 g，甘草9 g，生姜9 g) 超微饮片和小柴胡汤常规饮片均由广东九天绿药业有限公司提供（批；黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号110715-200815)；高效液相用甲醇为色谱纯（天津市科密欧化学试剂有限公司）；薄层层析硅胶G（青岛海洋化工有限公司）；其它试剂均为国产分析纯，购自广州化学试剂公司；高纯水为本实验室自制。 　　1.2 仪器 　　UltiMate-3000型高效液相色谱仪（美国戴安公司）； UV－2401PC分光光度仪（日本岛津公司）； GL-10M高速冷冻离心机（长沙湘智离心机仪器有限公司）；HHS-4S型电子恒温不锈钢水浴锅（上海市南阳科学仪器厂）；766-1型远红外辐射干燥箱（南阳科学仪器厂）；CP225D型电子天平（德国SARTORIUS AGGOTTINGEN公司）；Nikon Eclipse E600生物显微镜（日本尼康公司）；Nikon Coolpix 4500数码相机（日本尼康公司）。 　　2 方法 　　2.1 小柴胡汤供试样品的制备 　　按处方比例分别称取小柴胡汤超微饮片及常规饮片39 g，分别加药材总量5，10，20倍溶剂水（90℃以上蒸馏水），超微饮片置100℃的水浴锅中浸泡2次、常规饮片回流提取2次，30 min/次，离心（5 000 r/min,10 min,25℃）次，取上清液浓缩定容至250 ml（0.156 g·ml-1），备用。 　　2.2 小柴胡汤超微饮片粒度检测 　　取小柴胡汤超微饮片待检样品少许，制成临时水装片，显微镜下观察，计算样品细胞破壁率。 　　2.3 小柴胡汤两种饮片黄芩苷薄层色谱鉴别 　　小柴胡汤超微饮片样品、常规饮片样品、阴性样品及对照品试液均按《中国药典》“小柴胡颗粒”“鉴别”项下方法制备。 　　2.4 水溶性浸出物测定 　 　　按照水溶性浸出物测定法项下的热浸法（《中国药典》2005年版附录XA)测定。 　　 　　2.5 小柴胡汤两种饮片总黄酮溶出量及溶出速度测定 　　2.5.1 样品供试液制备 　　①精密移取“2.1”项下制备样品各50 ml，浓缩至15 ml，加95％乙醇35 ml醇沉，静置过夜。次日抽滤，滤液加70%乙醇定容至50 ml。②取上述试液各1.0 ml移于蒸发皿中水浴挥干，50％甲醇溶解，定容至100 ml作为供试液。 　　2.5.2 标准曲线制作 　　精密称取黄芩苷标准品6.60mg，50％甲醇溶解定容至10 ml。分别吸取0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 ml加50%甲醇定容至10 ml作为标准品试液。以277 nm作为检测波长测其吸收值（Abs），以浓度为横坐标(X), Abs为纵坐标（Y）得回归方程Y=58.4X+0.006 5，r2=0.999 9,线性范围0.006 6～0.033 0 mg· ml-1。 　　2.5.3 总黄酮溶出量测定 　　以50％甲醇溶液作为空白对照调整基线，取“2.5.1”项各供试液在277nm处测定吸收值，根据标准曲线计算小柴胡汤两