小檗胺诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的实验研究_医学论文.doc免费

小檗胺诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的实验研究_医学论文 小檗胺诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的实验研究_医学论文 【摘要】 ［目的］ 研究小檗胺诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的机制。［方法］ MTT法测人白血病Jurkat细胞IC50值及细胞毒作用，Hoechst33258荧光染色法观察小檗胺凋亡小体形成，流式细胞仪Annexin-Ⅴ FITC-PI法检测细胞凋亡发生率，PI染色法检测凋亡峰及细胞周期，同时流式细胞仪检测细胞caspase-3蛋白表达。 ［结果］ 小檗胺能选择性抑制人白血病Jurkat细胞生长且呈浓度依赖关系，作用48h Jurkat细胞IC50值为6.6±0.5μg/ml；小檗胺能诱导Jurkat细胞凋亡，使细胞周期阻滞于S期；同时细胞caspase-3蛋白表达增高。 ［结论］ 小檗胺能激活caspase-3蛋白表达，诱导人白血病Jurkat细胞凋亡且呈时效关系。 【关键词】 Jurkat细胞 Experimental Study of Berbamine Inducing Apoptosis in Human Leukemia Jurkat Cells Abstract: ［Purpose］ To explore the mechanism of berbamine inducing apoptosis in human leukemia Jurkat cells. ［Methods］ IC50 value and cytotoxity of human Jurkat cells were detected by MTT method apoptotic body, by fluorescent staining with Hoechst33258 cell apoptotic rate, by FCM with Annexin-Ⅴ FITC-PI staining method apoptotic peak, cell cycle and protein expression of caspase-3, by FCM. ［Results］ Berbamine could significantly inhibit the proliferation of Jurkat cells in a dose-dependent manner and the IC50 value was 6.6±0.5μg/ml at 48 hours. Berbamine also selectively induced apoptosis of Jurkat cells which were arrested in the S phase. In addition, expression of caspase-3 protein of Jurkat cells increased after exposure to berbamine. ［Conclusions］ Berbamine can selectively induce apoptosis of human leukemia Jurkat cells in the manner of dose and time dependence through up-regulation expression level of caspase-3 protein. Key words: berbamine Jurkat cells apoptosis caspase-3 小檗胺是一种双苄基异喹啉生物碱类化合物，具有抗氧化、免疫抑制、升高白细胞等多种临床作用[1]。最近的研究表明，小檗胺能调节细胞内游离钙浓度[2,3]，下调多药耐药基因表达以逆转多药耐药[4]，有少量研究显示其对肿瘤细胞的增殖抑制作用[5,6]，但其作用机制仍不甚清楚。本实验观察小檗胺对人白血病Jurkat细胞凋亡诱导作用，并对其作用机制进行探讨。 1 材料与方法 1．1 药品与试剂 MTT、碘化丙啶（PI）、小檗胺、Hoechst33258为Sigma公司产品，RPMI 1640培养基为美国Hyclone公司产品，Annexin-Ⅴ FITC-PI试剂为Immunotech公司产品，Cytofix/Cytoperm、Caspase3-PE及鼠IgG1-FITC/PE同型阴性对照为美国Pharmingen公司产品。 1．2 实验材料和主要仪器 细胞培养瓶及培养板为丹麦Nunclon公司产品；超净工作台及CO2培养箱为德国Heraeus产品；Wallac酶标仪为芬兰产品；FACSCan流式细胞仪为美国BD公司产品；Axioskop 2荧光显微镜为Zeiss公司产品。 1．3 细胞系及培养