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小鼠前向运动精子分离采集技术改良_医学论文 小鼠前向运动精子分离采集技术改良_医学论文 【摘要】 目的 提高从小鼠附睾采集的精子中前向运动精子的比例。 方法 设计“双舱培养皿”和“双舱浮游法（B法）”采集小鼠精子,并与当前普遍采用的“常规浮游法（A法）”进行配对比较实验。采用A,B法分别采集同一只小鼠的双侧附睾精子。 结果 前向运动精子活跃地从“双舱培养皿”的内舱游出至外舱。A、B两法分离得到的前向运动精子百分率分别为(56.83±7.23)％和(77.33±5.69)％,变异系数分别为12.72％和7.36％,差别具有统计学意义。 结论 “B法”能稳定显著地提高前向运动精子的百分率,优于“A法”。 【关键词】 附睾 精子 精子能动性 疾病模型 动物 ABSTRACT: Objective The technique of mouse sperm collection is common used in many fields of life science currently. The aim of this research is in order to improve the ratio of forward motile sperm collecting from mouse epididymides. Method A novel double chambers dish and convenient double chambers swim method were designed and compared with conventional swimup method which is in common used nowadays. Experiments showed that the forward motile sperm swimout actively from the innerchamber and the rate of forward motile sperm increased. Sperm was collected from different side of the same mouse by using conventional swimup or double chambers swim method,respectively. Result The means of the rate of forward motile sperm collected were 56.83％±7.23％ with CV12.72％ in “conventional swim％±5.69％ with CV7.36％ in “double chambers swim” group, respectively. Statistical analysis showed there are significant differences between two datas according to the paired t 　　 KEY WORDS: epididymis； sperm； perm motility； disease models,animal 福建医科大学学报 2008年7月 第42卷第4期江 帆等：小鼠前向运动精子分离采集技术改良小鼠精子采集技术是受精机制研究和生殖工程中常用的实验方法[1]。自然小鼠精液中含有结构、功能并不一致的多种精子和少量生殖道脱落细胞,只有活跃向前运动的精子（前向运动精子）具有正常生理功能,才能游到受精地点与卵细胞发生受精。因此,快速简便地获得高百分率的前向运动精子,是进行实验的重要前提。目前国内外普遍采用的“常规浮游法（A法）”是将含有成熟精子的小鼠附睾尾或输精管放在培养液里剪开,让其中的前向运动精子浮游到培养液中[2],其收获的前向运动精子的百分率不高且不稳定。笔者改良设计一种新型简便的“双舱浮游法（B法）”,并与A法进行比较。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 仪器 　　35 mm塑料培养皿（江苏海门联合塑料制品公司）, 0.5 mL微型塑料离心管（EP管, 江苏碧云天生物技术研究所）,20 mL一次性无菌注射器（福建莆田仁德医疗器械有限公司）,血球分类计数器（福建罗源医疗器械二厂）,超净工作台（HF safe 1200,上海力申科学仪器有限公司）,CO2培养箱（BB16HF,上海力申科学仪器有限公司）,光学显微镜（BHT日本Olympus公司）。 　　1.1.2 动物 　　8～12周龄的普通级雄性昆明小鼠，体质量18～25 g（福建医科大学实验动物中心）。 　　1.1.3 试剂 　　小鼠精子培养液M16按文献[3]配制,