小鼠促进骨髓抑制恢复相关因子IL7基因的识别与克隆_药学论文.doc免费

小鼠促进骨髓抑制恢复相关因子IL基因的识别与克隆_药学论文 小鼠促进骨髓抑制恢复相关因子IL基因的识别与克隆_药学论文 作者：沈娟,胡耀华,邵红伟,肖兰凤 【摘要】 目的 寻找促进骨髓抑制恢复的相关细胞因子，进行骨髓抑制时基因表达差异分析，并对表达上调较大的细胞因子进行克隆验证。方法 尾静脉注射5构建小鼠骨髓抑制模型，运用基因芯片方法分析正常小鼠与骨髓抑制模型第0，3，7，11，14天的基因表达差异，针对表达上调较大的鼠IL基因设计引物，以RT克隆其编码序列，并构建phCMV/IL真核表达载体。结果 得到一组符合促进骨髓抑制恢复细胞因子特点的基因，其中细胞因子IL表达量升高30倍。结论 IL符合促进骨髓抑制恢复细胞因子的特点，为研究骨髓抑制恢复的新方案奠定了基础。 【关键词】 基因差异表达；IL；基因克隆；骨髓抑制 　　Abstract:Objective To find the cytokines that antagonized myelosuppression, and analyze gene expression in myelosuppressed mice and confirm remarkable upregulation of gene expression. Methods The myelosuppressed mice model was made by injection of 5Fu in tail veils. The gene differential expression in day 0, 3, 7, 11 and 14 respectively were analyzed with genechip. Specific primers of IL7 which rose remarkably was designed to clone its fulllength coding sequence (CDS) by RTPCR, and then the eukaryotic vector phCMV/IL7 was constructed. Results A group of cytokines that might play positive regulatory roles in suppression and regeneration of hematopoiesis were found. The expression level of IL 7increased by 30 times compared with the normal control. Conclusions IL7 was a potential upregulating cytokine, and might be clinically used for myelosuppression. 　　Key words:gene differential expression; ILoning; myelosuppression 　　癌症是当今人类生命的一大杀手，而化学治疗和放射治疗以及许多其他抗肿瘤治疗方法，都是针对快速分裂的细胞，因而主要副作用是令同样快速分裂的血细胞前体——造血干细胞受抑制，称为骨髓抑制。它可导致贫血、抗感染能力下降（免疫抑制）等不良反应，从而严重影响肿瘤的治疗效果。在骨髓移植恢复中，骨髓抑制恢复造血刺激因子在血象调节中起着至关重要的作用，恢复的正刺激因子在骨髓抑制时表达均应激升高，后随着骨髓恢复降低至正常表达水平，寻找骨髓抑制恢复中的关键因子意义重大。 　　作为白细胞介素家族成员之一，1989年白细胞介素被发现并命名。它全长1 589 bp，包含6个外显子（531 bp）、相应的内含子、5′和3′非翻译区；经过转录、翻译、切掉信号肽、修饰加工，形成成熟的含152个氨基酸的IL蛋白质，是相对分子质量为25 kDa的糖蛋白［1］。IL是一种多效细胞因子, 具有广泛的免疫效应，在T细胞的生长、存活及分化方面有重要作用［2］，同时有潜在趋化性质, 介导单核细胞参与炎症反应。近几年发现IL在多方面均发挥很大的潜在价值，在慢性粒细胞白血病［3］、抗肿瘤［4］、抗HIV病毒感染［5］、急性冠脉综合征［6］等病理方面均有显著作用。 　　本实验室经大规模基因表达差异分析发现，IL基因在小鼠骨髓抑制模型中表达明显升高，可能是自体促进骨髓抑制恢复的因素之一。在正常小鼠中，IL由于表达量较低，不易克隆。但在骨髓抑制模型小鼠的骨髓组织中克隆得到了IL基因，验证了IL基因上调，然后将其构建到真核高效表达质粒phCMV中，为进一步验证其在骨髓抑制恢复方面功能奠定基础。 　　1 材料与方法