实验性脑出血大鼠脑内HSP 70 与Bcl-2的表达_医学论文.doc免费

实验性脑出血大鼠脑内HSP 70 与Bcl-2的表达_医学论文 实验性脑出血大鼠脑内HSP 70 与Bcl-2的表达_医学论文 作者：魏秀娥，时宏娟，荣良群，沈霞 【关键词】脑出血 　　摘要:目的探讨急性脑出血大鼠脑内热休克蛋白HSP70与凋亡蛋白Bcl-2的表达变化。方法成年雄性SD大鼠随机分为生理盐水对照组与脑出血组（36只），采用自体血注入方法建立大鼠脑出血模型。免疫组织化学法检测HSP70与Bcl-2的表达。结果免疫组化示HSP70与Bcl-2在脑内广泛表达，模型组HSP70出血后6h出现阳性细胞表达，24h有较明显的表达，72h阳性细胞表达仍在增加Bcl-2阳性细胞12h表达开始增加，48h达高峰。结论急性脑出血后大鼠脑内HSP70与Bcl-2表达均增强，二者均以皮质和海马区表达为主。 　　关键词:脑出血免疫组织化学大鼠 　　Abstract:ObjectiveToinvestigatetheexpressionofHSP70andBcl-2inratbrainafteracuteintracerebralhemorrhage（ICH）.MethodsRatswererandomlydividedintoaNScontrolgroupandamodelgroup（n=36each）.ICHmodelwases-tablishedbyinjecting50μlofautologousbloodintothecaudatenucleus.Atsixtimepoints（6h，12h，24h，48h，72hand1wafterintracerebralhemorrhage）theexpressionsofHSP70andBcl-2wereexaminedbyimmunohistochemistry.ResultsItwasfoundthatHSP70andBcl-2wereexpressedextensivelyintheratbrain.HSP70andBcl-2expressionsreachedthepeakat72hand48h，respectively.ConclusionTheexpressionsofHSP70andBcl-2areincreasedaftercerebralhemorrhage.Thechanges，mainlyinthecortexandhippocampus，arerelatedtothedegreeofinjury，thetimeelapsedandthelocationoftheaffectedregion. 　　Keywords:intracerebralhemorrhageimmunohistochemistryrat 　　近年来研究表明，细胞凋亡是出血性脑损伤的重要机制之一，Bcl-2是一种凋亡抑制基因，在细胞凋亡调节中起到重要作用而HSP70是一种应激保护蛋白，可抑制应激激活蛋白激酶，并发挥其分子伴侣作用，在线粒体上的HSP70可能通过对变性的细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2加以修复或防止其被降解，恢复其凋亡抑制功能［1］。本实验拟在探讨此两种蛋白在急性脑出血大鼠脑内的表达变化规律及二者之间的可能关系。 　　1材料和方法 　　1.1材料 　　1.1.1动物健康成年雄性SD（Sprague-Dawley）大鼠72只，体重220～250g，由徐州医学院实验动物中心提供。 　　1.1.2仪器动物立体定位仪（江湾二型）100μl微量进样器（浙江省医用器械厂）KD1508转轮式切片机（浙江金华科迪仪器设备有限公司）OLYMPUS光学显微镜（日本）。 　　1.1.3主要试剂与药品鼠抗Bcl-2单克隆抗体与鼠抗HSP70单克隆抗体（美国SantaCruzBioTech公司产品）即用型二步法免疫组化检测试剂盒、DAB显色试剂盒（均为北京中山生物科技有限公司产品）10%水合氯醛、PBS缓冲液及其他试剂均为国产分析纯级。 　　1.2方法 　　1.2.1实验动物分组与处理大鼠随机分为对照组（NS组）、模型组（出血组），时间点为6，12，24，48，72h，1周，每时相点各取大鼠6只。 　　1.2.2模型制备参照Yang等［2］报道的方法改进，根据《大鼠脑立体定位图谱》［3］确定尾状核的位置:前囟前0.2mm，矢状缝向右3.0mm，深6.3mm为注射点。大鼠经10%水合氯醛（350mg.kg）腹腔麻醉俯卧位固定于立体定位仪上，头皮正中消毒后矢状位切开约1.5cm，暴露前囟点，据图谱调整立体定位仪于注射点（A0.2mm，L3.0mm，V6.3mm），钻颅打孔（直径约1mm）将鼠尾置于40℃水温浴10min后取出擦干消毒，距离鼠尾末端3cm处剪断，