树胶脂毒素对体外培养的背根神经节神经元的影响_医学论文.docVIP

树胶脂毒素对体外培养的背根神经节神经元的影响_医学论文 树胶脂毒素对体外培养的背根神经节神经元的影响_医学论文 作者：于振海 孙毅 张璐萍 阚氏海 刘蛟 黄飞 【摘要】 目的 观察树胶脂毒素对体外培养大鼠脊神经背根神经节神经元的影响。方法 对Wistar胎鼠背根神经节神经元行原代培养，采用100 nmol/L浓度的树胶脂毒素对培养的神经元进行处理，运用MTT比色法和细胞形态学分析法，观察树胶脂毒素对神经元存活及形态的影响。结果 背根神经节神经元存活率降低，神经元呈簇状聚集明显，细胞轮廓增强，胞体缩小，突起断裂或变短甚至消失。结论 100 nmol/L浓度的树胶脂毒素对背根神经节神经元有损伤作用。 【关键词】 树胶脂毒素；背根神经节；神经元 【Abstract】 Objective To observe the influence of resiniferatoxin on the dorsal root ganglion of rat.Methods The dorsal root ganglion cell culture model was found, disposed with the resiniferatoxin in the density of 100 nmol/L，and then use the method of MTT and observed the cell’s morphologic change.Results The resiniferatoxin reduce the survival of the cell.Cell gathered obviously,cell body became smaller,cell processes faulted or shortened or even disappeared.Conclusion The density of the 100 nmol/L resiniferatoxin can damage the dorsal root ganglion cells. 【Key words】 resiniferatoxin,dorsal root ganglion,neuron 膀胱灌注辣椒辣素在临床上主要用于治疗下尿路症状（lower urinary tract symptom，LUTS）。近年来辣椒辣素的类似物树胶脂毒素( resiniferatoxin，RTX)由于疗效好、副作用轻，逐渐取代了辣椒辣素。RTX是从大戟色素体树脂中提炼出来的一种超强的，具有与辣椒辣素相似的生物学活性的物质，其通过与初级传入神经元上的辣椒素受体(vanilloid receptor 1,VR1)结合，引起膀胱传入纤维脱敏，从而减少感觉纤维的传入，发挥其对下尿路症状的治疗作用。虽然RTX在膀胱灌注治疗下尿路症状的临床应用中没有发现致癌或促进肿瘤生长作用，但是其远期安全性仍然是未知的。 临床最关心的是RTX对膀胱的传入神经是否有损伤，传入神经的胞体位于脊髓背根神经节。为此，本研究利用体外建立胎鼠背根神经节神经元培养模型，采用临床膀胱灌注浓度的RTX对培养的背根神经节神经元进行处理，观察在此浓度下背根神经节神经元的存活率及形态学改变，从而探讨其对背根神经节神经元的影响，为临床应用RTX膀胱灌注治疗下尿路症状的用药安全性提供一定的理论及实验依据。 1 材料与方法 1.1 试剂和仪器 DMEM/F12培养基,胎牛血清均购自GIBCO公司, 树胶脂毒素（resiniferatoxin，RTX）购自美国LKT公司，MTT、多聚赖氨酸购自Sigma 公司，Olympus CKX型倒置相差生物显微镜由滨州医学院形态学实验室提供。 1.2 DRG(背根神经节)神经元的培养 在无菌条件下,取胚龄为15 d胎鼠30只,在解剖显微镜下取每只胎鼠的背根神经节,每只胎鼠可得到30个左右的背根神经节。在解剖显微镜下,用显微外科镊子和手术刀移去神经节外膜和神经根。将除去神经节外膜的背根神经节移入含有0.25%胰蛋白酶的离心管内37℃水浴中消化, 20～30 min后加入含血清的培养液，以终止消化。用吸管吹打数次,使神经节组织块分散,用200目的尼龙网滤去细胞团块,将得到的细胞悬液离心5 min(1 000 r/min),弃上清液,在离心管内加入适量培养液,用吸管轻轻吹打,制成均匀的细胞悬液,取样计数后用培养液调整细胞浓度为3×105个细胞/μl，种植在24孔（每孔加入1μl细胞悬液）培养板内涂有多聚赖氨酸的圆盖片上，标上细胞名称、组号和接种日期等。将标本移入37℃、5%CO2培养箱内孵育。 1.3 细胞分组和处理 上述培养的DRG神经元,于37℃、5%CO2及饱