特异性抑制Rho%2fROCK信号通路对脊髓星形胶质细胞增殖的影响.doc

A dissertation submitted to Huazhong University of Science and Technology for the Degree of Master of Medicine The Effect of Rho/ROCK Pathway Inhibition on Cultured Astrocytes from Rat Spinal Cord  Candidate: Major: Supervisor:  Liu Miao Neurology prof. Wang Wei  Huazhong University of Science Technology Wuhan 430030, P. R. China May, 2012 独创性声明 本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或 集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文 中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。 学位论文作者签名：  日期：  年  月  日  学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本 人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索， 可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密□ ，在_____年解密后适用本授权书。 本论文属于 不保密□。 （请在以上方框内打“√” ）  学位论文作者签名：  指导教师签名：  日期：  年  月  日  日期：  年  月  日 目  录  第一部分  特异性抑制 RHO/ROCK 信号通路对脊髓星形胶质细胞增殖的影响1  中文摘要1 ABSTRACT2  前  言3  材料和方法 5  结  果 13  讨论20 参考文献22  第二部分  文献综述25  RHO/ROCK 信号通路和脊髓损伤25 参考文献32 附录38 硕士期间已录用的主要论文 38 缩略语39  致  谢40 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文  第一部分  特异性抑制 Rho/ROCK 信号通路对脊髓星形胶质细胞  增殖的影响 中文摘要 目的：采用 Y27632 特异性抑制 Rho/ROCK 信号通路，观察该干预对体外培养的脊 髓星形胶质细胞增殖的影响，并进一步探讨其影响增殖的可能机制。 方法：原代培养大鼠的脊髓星形胶质细胞，实验分为对照组（正常培养基）和 Y27632 干预组(培养基中含 10μM Y27632)；在不同时间点（0、6、12、24 和 48h）， 计数各组细胞的数量，应用流式细胞技术检测细胞周期的分布，western blot 检测星 形胶质细胞细胞周期相关蛋白（cyclin D1、cyclinE、CDK4、P27）和 p-ERK 的表达 情况，进一步采用荧光免疫细胞染色法检测实验组摄取 Brdu 的细胞比例与 ERK 信号 途径的关系。 结果 ： 与对照 组相比， Y27632 干预组 细胞数量显 著增加 (6、12、 24 和 48h)(P0.05)，同时处于 S 期细胞的百分率明显上升（6h 和 12h, P0.05）；在不同 的时间点，Y27632 组细胞周期相关蛋白（cyclin D1、CDK4，cyclin E）及 p-ERK1/2 的表达量明显高于对照组；与对照组相比，Y27632 干预组 BrdU（+）的细胞比例在 6、 12、24h 点明显增加(P0.05)，同时给予 Y27632 和 ERK 抑制剂 U0126 的干预时 BrdU （+）的细胞比例无明显增加。 结论：Rho/ROCK 信号通路特异性抑制剂 Y27632 可以显著促进体外培养脊髓星形 胶质细胞的增殖和细胞周期的进展，提示 Rho/ROCK 信号通路参与了脊髓星形胶质细 胞细胞的增殖；Rho/ROCK 信号通路可能通过调控下游的 ERK 信号途径影响星形胶质细 胞的细胞周期进展。 关键词：Rho/ROCK；星形胶质细胞；细胞周期；增殖，Y27632 1 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文  Part One  Effect of Rho/ROCK Pathway Inhibition on  Cultured Spinal Cord Astrocytes Proliferation Abstract Objective：To study the effe