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PCR引物设计;PCR 引物设计; ;引物;引物设计的原则;主要影响因素;引物设计的要点;;;酶切位点的添加;PCR设计引物时酶切位点的保护碱基表（例）;Primer Premier 5.0;Primer Primer 5.0;使用步骤及技巧;引物设计功能;进行引物设计时，点击 按钮，界面如下：;进一步点击 按钮，出现“search criteria”窗口，有多种参数可以调整。;引物类型;默认成对（pairs）显示，共找到100对引物，并按照优劣次序（Rating）排列，满分100分，即各项指标基本都达标。
点击其中一对引物，例如第1对，并挪开或退出该窗口，显示“primer primer 5”主窗口，如下：;产物以及模板位置;一对理想的引物应当不存在四种指标中的任何一种，因此最好的情况是最下面的分析栏里没有 ，只有 。
但是，通常情况下，会出现这种情况：
;Edit here;Results Report;其他功能;限制性内切酶分析;Melting temperature graph;GC% graph;Stability;Primer-blast引物验证;在“PCR Template”下面的文本框，输入目标模板的序列，FASTA格式或直接用Accession Number。如果你在这里输入了序列，是用于引物的设计。;特异性（Specificity）;谢谢！
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