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RNA 干扰 1：简介 2：RNAi 的研究进展 3：RNAi 的特征 4: RNAi 的分子机制 5: RNAi 的生物学意义 6: RNAi 的应用 7：应用前景展望 1: 简介 RNA 干扰(RNA interference , RNAi) 是生物体内的一种通过双链RNA (dsRNA) 来抵抗病毒入侵和抑制转座子活动的自然机制。 双链RNA 与同源mRNA 互补结合而使特定基因失活，这一过程已经在包括拟南芥、线虫和真菌等多种模式生物中得到揭示。 近来研究表明，21～25 nt 的小干涉RNA ( small interference RNA ,siRNA) 可介导哺乳动物细胞特异性基因沉默。 RNAi 具有高效性和高度特异性，成为关闭基因的新技术,而在基因功能研究和疾病基因治疗中发挥重要作用。 在基因功能研究和疾病基因治疗中发挥重要作用。 2： RNAi 的研究进展 10 年前，科学家们在向紫色牵牛花中转入色素合成基因时，观察到“共抑制” (cosuppression) 现象，不仅是转入的基因未表达，而且自身的色素合成也减弱了。 1998 年，在研究秀丽隐杆线虫基因沉默机制时，将反义RNA、正义RNA 和双链RNA(dsRNA) 分别导入虫体，令人惊奇的是，双链RNA 较正义和反义核酸更能高效地特异性阻断相应基因的表达。抑制基因表达的效率更高。这种现象被称为RNAi。 动物中双链RNA 诱导的RNAi ，与植物中的共抑制和真菌中的压制现象是高度保守的相似机制，具有相同的起源，是生物界中的普遍现象。 虽然RNAi 在小鼠卵细胞和胚胎中得到证实，但双链RNA 在其他哺乳动物细胞通常引起整个细胞蛋白合成非特异性抑制，mRNA 降解，细胞死亡。 最近，德国科学家发现， 长度仅为21～25nt 的双链RNA (小干涉RNA , siRNA) ，能激发哺乳动物细胞特异性RNAi 效应，并抑制非特异性RNAi 反应，从而为RNAi 技术广泛用于人类基因功能研究以及疾病基因治疗奠定了基础。 3： RNAi 的特征 RNAi 具有如下重要特征： a：RNAi 是双链RNA 介导的转录后基因沉默(PTGS) 机制 。 b：高稳定性： 以3′端悬垂TT 碱基的双链RNA 尤为稳定。 c：高效率： 能在低于反义RNA几个数量级的浓度下，使目标基因表达降到极低水平甚至完全“剔除”，从而产生缺失突变体表型。 d：双干扰系统：哺乳动物细胞中存在两条相互独立的“干扰”途径：非特异性干扰反应，由30 bp 长序列双链RNA 介导，可导致整个细胞非特异性蛋白合成抑制及RNA 降解；特异性干扰反应，由21～25 nt的小干涉RNA 介导，只降解与其序列相应的单个基因的mRNA。 e：高特异性：小干涉RNA 单个碱基改变就可能使RNAi 失效。 f： 高穿透性：可在不同细胞间长距离传递和维持；在线虫中甚至可通过生殖系传递到后代中去 。 4： RNAi 的分子机制 siRNA：小干扰RNA (small interference RNA ) 。 RISC：核酸诱导的沉默复合物(RNA induced silencing complex ) ，能与siRNA结合。 DICER ：dsRNA 特异性核酸内切酶( dsRNA specific endonuclease ）,是RNA 酶Ⅲ家族中dsRNA 特异性核酸内切酶，具有解旋活性。它的作用底物是长度200～500bp左右的dsRNA。 RdRP：RNA 依赖性RNA 多聚酶(RNA dependent RNA polymerase ) ，作用是以siRNA 为一种特殊的引物，以靶mRNA为模板，将mRNA 通过聚合酶链式反应转变为dsRNA ，为DICER 提供底物。 5： RNAi 的生物学意义 5.1 　维持基因组稳定 5.2 保护基因组免受外源核酸侵入 5.3 基因表达调控 5.1 维持基因组稳定 抑制转座子运动： 转座子拷贝如果随机反向整合到邻近启动子下游，其转录本就可以和原转座子转录本一起形成dsRNA ，从而引发针对此转座子及其拷贝的转录后基因沉默。 异染色质的形成与维持：真核细胞异染色质包含了大量的重复序列和转座子。位于着丝点附近的异染色质通常和细胞分裂时的染色体分离有关，插入到异染色质区域的外源基因通常不表达。这是由于组成染色质的组蛋白H3被去乙酰化和Lys9的甲基化. 甲基化的Lys9可以和异染色质蛋白1 (HP1)结合，导致该区域转录阻滞。RNAi 和异染色质的关系正