第十一章 DNA合成.pptVIP

第三篇 遗传信息的传递 第十一章 DNA 的生物合成 第十二章 RNA 的生物合成 第十三章 蛋白质的生物合成 第十四章 基因表达的调控 学习策略： 基本概念 对比真核与原核生物复制的特点 半保留复制的实验依据 四、DNA复制需引物 RNA引物： 五、 DNA复制的高保真性 proofreading (校正) 第二节　参与真核生物DNA复制 的有关酶类及蛋白因子 一、DNA聚合酶（DNA polymerase） （二）RNA引物的合成 引发酶与DNA聚合酶α形成一个复合体，识别起始位点，以底物（NTP），DNA为模板，合成一个短链RNA（8～10个核苷酸）引物。 RNA引物的3’-OH末端为合成新的DNA单链的起点。 　　　DNA聚合酶α，以dNTP为原料，延长引物大约15-30个DNA。这种双反应使短的DNA连接到引物上。DNA聚合酶需要引物。前导链在复制的开始只需一个引物，而后随链中每个冈崎片段则需有各自的引物。 二、DNA链的延伸 （一）DNA片段的生成 冈崎片段（Okazaki fragment） 　　　1968年，冈崎(Reiji Okazaki)等人用3H-胸腺嘧啶核苷酸培养大肠杆菌，然后用密度梯度离心法分离标记的DNA产物，发现短时间内首先合成的是较短的DNA片段，接着再出现较大的分子。这说明这条新链是一段一段地、不连续合成的。这些DNA片段称冈崎片段。 复制方向与解链(复制叉移动方向)方向相反的子链为后随链，其合成是不连续的。 （二）RNA引物的水解 　　　一定长度的DNA片段形成后，在核酸酶和FEN I 的作用下，水解除去RNA引物。出现的缺口由DNA聚合酶δ催化DNA片段继续延长加以填补。 （三）DNA大分子的形成-终止 　　 DNA连接酶将后随链相邻的两个DNA片段连接起来，形成大分子DNA链。 比较： 二、原核生物的DNA的复制过程 （一）复制的起始 一、反转录过程 Reverse Transcription 二、线粒体DNA的复制 IT15基因（67个外显子，210 kb，编码产生一个约350 kD的huntington蛋白）。 开放阅读框5’端有一段CAG三核苷酸重复序列，随IT15而翻译出一段聚谷氨酰胺连接于huntington蛋白的N端。 CAG的异常扩增导致了该病，正常人CAG的重复次数为11-34之间，而患者在42次以上。 （二）错配修复 错配修复酶 着色性干皮病 （xeroderma pigmentosis,XP） 常染色体隐性遗传。皮肤对日光，尤其是对紫外线敏感。主要临床表现是皮肤雀斑样色素沉着，毛细血管扩张，局限性萎缩，疣状增生，浅表溃疡，最后可癌变。 这种病人的XP类基因（XPA、XPB、 XPC、XPF、XPG ）有缺陷，导致DNA损伤后的修复障碍。 四、线粒体DNA的复制 　　 二、DNA损伤的修复 （一）光修复(light repairing) 光修复酶(photolyase) UV 真核和原核细胞DNA复制的不同点 约50 nt / s 约10000 nt / s Dna A Dna B、 Dna C DNA拓扑异构酶 引物酶 SSB 3? 5? 3? 5? 引发体（primosome）： 解螺旋酶 （ DnaB）、DnaC蛋白、引物酶（ DnaG）和DNA复制起始区域的复合结构。 Dna G 辨认起始点 解链方向 3? 5? 3? 5? 引物：是由引物酶催化合成的短链RNA分子。 引物 3 HO 5 引物酶 2. 引物的形成 图12-12 原核生物DNA复制 前导链在聚合酶III与滑动夹子结合，连续合成。 后随链合成不连续：解旋酶（DnaB）和引物酶（DnaG）沿着模板移动。每1000-2000bp合成一个引物。聚合酶III延伸引物，达前一个冈崎片段。聚合酶I去RNA引物，并填补空隙。缺口由连接酶封闭。 （二）DNA片段的延长 在DNA-pol催化下，以dNMP的方式逐个加入引物或延长中的子链上，其化学本质是磷酸二酯键的不断生成。 酶： DNA-pol III核心酶（α、θ、ε）催化磷酸二酯键形成，2个β亚基构成环形的滑动夹子，γ亚基将滑动夹子组装到DNA上。 原料：四种dNTP 方向：5’ 3’（半不连续复制） 冈崎片段的合成 第五节 反转录过程及其他方式的复制 逆转录（reverse transcription） 遗传信息从RNA流