第四节清热凉血药.pptVIP

实验3 活体染色技术 显示细胞器  一、实验目的 2.掌握液泡系和线粒体的活体染色方法。 二、实验原理 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。可以用来研究生活状态下的细胞的形态结构和生理、病理状态。活体染色剂应选用那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。 二、实验原理 一般是以碱性染料最为适用，可能是因为它具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收的缘故。詹纳斯绿B和中性红是活体染色剂中最重要的碱性染料，对线粒体和液泡系各有专一性。 二、实验原理 1.中性红是一种弱碱性染料，当pH值为6.8～8时，中性红由红色变为黄色，pH值低于6.8时中性红呈现樱桃红色。活细胞吸收了中性红后，会将其定向地转运到液泡中。 二、实验原理 由于液泡内为酸性或中性环境，因此累积了中性红的液泡一般呈现樱桃红色或玫瑰红色，而细胞核和细胞质则不被染色。如果被染色的细胞发生死亡，则整个细胞呈现弥散性染色 二、实验原理 2.詹纳斯绿B是对线粒体专一性活体染色且毒性最小的碱性染料。通常它有两种存在状态，即氧化态和还原态。 二、实验原理 氧化态的詹纳斯绿B呈现蓝绿色，还原态的詹纳斯绿B则无色。线粒体中含有细胞色素氧化酶，它能氧化詹纳斯绿B，使线粒体显色，而线粒体外的詹纳斯绿B因呈现还原态而无色。 三、实验用品 三、实验用品 四、实验方法 四、实验方法 四、实验方法 四、实验方法 四、实验方法 五、注意事项 五、注意事项 2.切植物根尖时必须沿着中轴，应快速切下，使切面平整。 五、注意事项 3.用詹纳斯绿B染色时，将材料的一部分暴露于空气中，以便接触到氧气，使詹纳斯绿B充分氧化，或者将材料全部浸没于染料中，但是要用镊子经常将材料提出液面之上。 * * 1.了解活体染色技术的实验原理。 3.学会镜下如何辨认液泡系和线粒体。 1.器具：普通复式光学显微镜、载玻片、盖玻片、滤纸、擦镜纸、表面皿。 2.药品：Ringer氏液、1/3000中性红染色液、3/1000詹纳斯绿B染色液、香柏油、二甲苯。 1.取材：用双面刀片将植物幼苗根尖，沿着中柱做一纵切剖面。 2.染色：将切好的材料置于1/3000中性红染色液中，染色10～15min。 ㈠植物细胞液泡系的观察 3.漂洗：用Ringer氏液快速漂洗。 4.制片：将材料置于载玻片上滴加一滴Ringer氏液，盖上盖玻片，用镊子轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁。 ㈠植物细胞液泡系的观察 5.镜检：依次用10X物镜、40X物镜和100X油镜进行观察。 ㈠植物细胞液泡系的观察 1.取样染色：用镊子撕下洋葱鳞茎表皮一小片，撕裂而朝下放在3/1000詹纳斯绿B染色液上染色5～10min。 ㈡植物细胞线粒体的观察 2.制装片：将染色好的洋葱鳞茎表皮组织移载玻片中央，滴一滴Ringer氏液，盖上盖玻片。 3.镜检：依次用10X物镜、40X物镜和100X油镜进行观察。 ㈡植物细胞线粒体的观察 1.用中性红染色时，10～15min为佳。观察时先用10X物镜从分生区到成熟区进行观察，然后在40X物镜下观察细节点，100X油镜下观察效果并不理想。 * * * * *