纤维素降解菌JF14的分离鉴定及其固态发酵产酶研究.pdfVIP

研究论文 615 纤维素降解菌JFl4的分离鉴定 及其固态发酵产酶研究+ 袁宏伟吴琳黄俊生” (中国热带农业科学院环境与植物保护研究所，海南儋州571737) 摘要：从海南尖峰岭采集的土壤中分离得到一株高产纤维素酶的茵株JFl4。经形态观 察和ITS序列分析，鉴定该菌株为棘胞木霉Trichoderma aspereUum。对该菌株固态发酵产酶条 件进行研究。确定最佳产酶条件：培养时间为72h，稻草与麸皮质量比为3．5：1．5，l％的 6921．0IU／g．FPA酶活力为216．4IU／g。 关键词：棘胞木霉；鉴定；纤维素酶；固态发酵 纤维素是葡萄糖口一1，4一糖苷键连接而成的线状大分子物质，是植物体的主要成分之 一，全世界每年能生产近千亿吨的纤维素类物质。但由于纤维素中存在许多高能氢键，因 此其水解、利用较为网难，目前只有极少部分被利用，大部分的纤维素类物质都被闲置。 利用高压酸水解的方法虽能实现纤维素物质的利用，但此法需要高温高压设备，很不经 济，酶法分解则提供了一条捷径…。纤维素酶作为一种添加剂己越来越引起人们的重视， 并在酶制剂工业生产中取得了不同程度的效果，具有广泛的应用前景。但纤维素酶的高生 产成木是最大的制约因素。木霉Trechoderma sp．在土壤中广泛存在，其中包括里氏木霉 Tr／choderma reesei、绿色木霉Trichodermaviride、康宁木霉Trichoderma koningii和拟康氏木 霉Trichoderma 内外文献对以上四种木霉产纤维素酶的报道较多。棘孢木霉是我国新记录的4个木霉种中 的一个【3】，有文献报道认为它是荸荠贮藏期的一种主要的真菌性病害【4]。目前尚未发现 国内有关棘孢木霉产纤维素酶的文献报道。本实验室从海南尖峰岭国家自然保护区的原始 InternalTranscribed 森林土壤中分离得到一株产纤维素酶较高的菌株JFl4，经形态和ITS Spacer序列分析，鉴定此菌株为棘孢木霉Trichodermaasperellum。为了确定该菌株最佳产 酶条件，以稻草和麸皮两种廉价的农业废弃物为发酵基质，利用固体发酵方法对该菌株产 纤维素酶进行研究。 ·基金项目：国家科技基础条件平台建设资助项目(2005DKA21201—18) 作者简介：袁宏伟(1982一)，男，主要从事应用微乍物方面的研究。_T作单位：中国热带农业科学院环境与 yuananbang@163．corn ··通讯作者：黄俊生，男，研究员，主要从事微生物农药方面的研究。E—mail：H8881ll@126．com 616 植物保护与现代农业 1材料与方法 1．1 菌株来源 纤维素降解菌JFl4分离白海南尖峰岭国家自然保护区的原始森林土壤。 1．2培养基及试剂 1．2．1 菌种筛选培养基 初筛培养基：(NH4)2S041．59，KH2P04lg，MgS04·7H200．39，NaCl0．29，CaCl2 000ml，光华定性滤纸条若干(直径比平 0．39，ZnSO。、FeSO。及MnSO。微量，蒸馏水1 皿直径略小)。 1．59， 000ml。 酵母膏0．59，蒸馏水1 1．2．2发酵种子制备 培养基：马铃薯2009，葡萄糖209，水1 滤，滤液加葡萄糖后补足水至1000ml。无菌操作从保藏斜面上刮取1环孢子接种到上述 液体培养基中，28℃、200r／min振荡培养3d，作为种子。