GPⅢaT1565C点突变对FAK磷酸化影响的研究.pdfVIP

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2017-08-22 发布于安徽
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GPⅢaT1565C点突变对FAK磷酸化影响的研究.pdf

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130 2009年全国微循环与血液流变学基础研究及临床应用学术研讨会论文黑龙江省医院检验科150036胡惠静哈尔滨医科大学附属g--医院检验科150086刘彦虹 (human m和Nhe aTl565C基因。将PCR产物与质粒pcDNA3．1(+)酶切(HindI)、连接、转化，构建出真核表达载体pcDNA3．1(+)II 将构建的真核表达载体pcDNA3．1(+)II 11 II CHO细胞中，经G418筛选出稳定表达野生型GPb／Ⅲa和突变型GPb／IⅡaTl565C的CHO细胞系。流免疫沉淀、免疫印迹(Westernblot)和FCM细胞内染色等方法检测野生型和突变型GPⅡb／ⅢaClIO细胞 adhesion 经纤维蛋白原(fibrinogen，Fbg)激活后发生的粘着斑激酶(focal kinase，FAK)酪氨酸磷酸化和 II 丝氨酸磷酸化。结果成功获得GP IIb／llla 检测野生型和突变型GP II 48h分别有34．89％和73．84％发生FAK丝氨酸磷酸化。结论成功构建稳定表达野生型GPb／HIa和突变型 GPlI II 酸化和丝氨酸磷酸化，进而增强GPb／Ilia介导的细胞外向内信号转导功能。关键词GPⅡb／Sa；点突变；信号转导；粘着斑激酶；磷酸化 the in onFAK A of EffeetionofPointMutation IIaTl565C Study Glycoprotein Phosphorylation 删Hui-jingl，LIUYah-hon92‘ ofClinical Provincial (1．DepartmentLaboratory,HeilongjiangHospital，Harbin ofClinical Medical Second Laboratory,HarbinUniversityHospital，Harbin150086) hamster lines ConstructChinese and 【Abstract】Objective ovary(CHO)cellstablyexpressingwild·type RNAwasextractedfromhuman and GPⅡb。GPⅢa ．phosphorylation．Methods erythroleukemia(HEL)cells HI were RT-PCR．Theultimate andthevector andGPaTl565C amplifiedby amplifiedproducts peDNA3．1(+) thenthe were to werecutNhelandHindⅢr