发展中的DNA测序技术.pdfVIP

《生物工程进展》1997, . 17, . 4 V o l N o 发展中的DN A 测序技术 赵晓娟　刘金毅综述　蔡有余　琦祖和 　审校 ( 中国医学科学院　中国协和医科大学实验动物研究所　北京) 　　DN A 序列分析是基因工程和分子生物学 合酶合成出一系列以ddN T P 为 3 ′末端的不同 领域最重要的技术之一, 是了解基因结构和功 长度的新链, 电泳和放射自显影后, 能迅速地读 ( 出 序列。双脱氧法不仅具有化学法的优 能的基础。“人类基因组计划” DN A hum an genom e p roject ) 的实施, 有力地推动了高速DN A 测序 点, 而且极适于大规模测序。不久,M e ssin g 等 引入 噬菌体 13 为克 隆载体, 使单链 技术的发展。除经典的测序方法在技术环节上 M DN A [ 1 ] 的不断改进外, 近年来发展了一些全新的DN A DN A 制备的困难迎刃而解 。至此, 双脱氧法 测序方法, 如毛细管凝胶电泳法、阵列毛细管凝 结合M 13 克隆成为获取DN A 序列信息的一 胶电泳法、超薄层凝胶板电泳法以及不用电泳 种最经典方法。之后, 人们在DN A 序列分析的 分离的直接测序技术, 如杂交法、质谱法、原子 基本策略、提高测序的精度及效果等方面进行 探针法、流动式单分子荧光检测法等。 了不懈的努力。例如, 1982 年, 洪国藩建立了 经典的 测序就其原理来说主要分为 “非随机” 序列测定法, 使测序速度明显提 DN A DN A 化学测序法和双脱氧链终止法。1977 年, [2 ] M ax 高 ; 由于双链DN A 测序省去了M 13 测序亚 am 和 G ilb er t 报道了通过化学降解测定DN A [3 ] 克隆的构建这一步骤, 近些年来倍受欢迎 ; 使 序列的方法。这一方法是将模板DN A 的一端 用碱基类似物 或 7 取代 d IT P deaza dGT P 标记之后, 在四组或五组互为独立的化学反应 dGT P , 减少了凝胶 电泳后压缩效应给阅读带 中分别得到部分降解, 其中每一组反应特异地 来的麻烦; 各种DN A 聚合酶的改进, 如人工修 针对某一种或某一类碱基。在这几组反应中, 通 ( ) 饰的 7 聚合酶 也称测序酶