一种粘细菌发育相关基因的分离及敲除分析.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 ’( )! .’ ) # 年 月 $$ % !#$ %’()(*(+$ ,-$ *+,- $$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 一种粘细菌发育相关基因的分离及敲除分析 毛晓华 汪道涌 刘 芳 （东南大学医学院生化教研室 南京 2$$$/ ） 摘 要： 是与粘细菌（ ）发育特异性转录因子 具有亲和力的蛋白因 67+8 !#$%$%%’ #()*+’ 67+9 子，协同67+9 参与对靶基因的调控。根据67+8 氨基端氨基酸序列，设计简并性寡核苷酸引 物对染色体 :.9 进行;= 扩增，以扩增产物为探针自粘细菌小型基因文库筛选出同源的 阳性片段。 基因阻断分析表明， 功能缺失延缓子实体发育并降低粘孢子 ! 3?@ ,(%A - ./ - ./ 产率，提示- ./ 与粘细菌发育分化有一定联系。 关键词：粘细菌，发育，基因克隆，基因敲除 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） B10 9 $$$25%$/ $$ $#5$#2%5$3 粘细菌是一种具有社会性行为（ ）的原核生物，在营养缺乏的应激条件 C’DEF( @-GFHE’7 3 下，粘细菌启动复杂的生活周期， 以上的细胞有序地向一个中心聚集，形成多细胞结 2$ 构的子实体，在子实体内部分细胞程序性死亡，其它细胞渐渐分化为对环境具有抗逆性的 ［，］ 粘孢子2 。以粘细菌为模式系统的发育调控研究领域中目前有两个问题令人关注，一是 细胞间的通讯，二是发育相关基因的表达调控。67+9 是粘细菌发育所必需的一种转录因 ［］ 子，影响着其它一些发育相关基因的表达# ，而且67+9 又是一种信号转导蛋白，在发育进 ［］ ! 程中作为协调细胞间信号的一个调节点 。我们在研究67+9 对靶基因的调控机制时发 ［］ 3 现67+9 必须与其结合蛋白67+8 一起才能与:.9 顺式元件结合 。因此克隆- ./ 基因， 明确其编码产物的性质对进一步理解67+9 发育调控作用的分子机制具有意义。本文报 道自黄色粘细菌中分离含有- ./ 的:.9 片段，并对其进行敲除分析。 ! 材料和方法 ! ! 质粒、菌种、培养基、试剂和酶 菌株和质粒： 为粘细菌野生型菌株，由 赠送， !# !# ! !#$%$%%’ #()*+’ :I62 :7 ) J ) A,’+K- 为 阻断株，本研究构建； 为大连宝生物公司产品； 为 ! ) #()*+’ - ./ #LD - ./ MN620? MN68 克