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维普资讯 丝状真菌产纤维素酶条件的研究 1．华中农业大学 2．咸宁职业技术学院生物工程系 ■ 曾青兰 1,2洪玉枝’刘子铎’ 摘 要：以稻草作为唯一碳源，研究了氮源、接种量、瓶装量、发酵时间、初始发酵温度、培养基初始 pH等对高产纤维素酶的丝状真菌菌株Gibberellafujikuroi产酶的影响。在最适条件下菌株培养 120h，培养液中Cx酶活达到1．72267IUm／L。同时测得其天然纤维素酶活力、滤纸酶活力分别为 0．36813IU／mL、34424IU／mL。 关键词：纤维素酶；丝状真菌；秸秆；酶活力 一 前言 采用18SrRNA基因分析 1【1】：提取丝状真菌的DNA， 纤维素是植物光合作用的主要的产物 ，是自然 用真菌核糖体DNA转录间隔区(ITS)通用引物进行 界中存在量最大的一类可再生资源，全世界每年可产 PCR扩增 ，扩增产物纯化后，经北京三博志远生物 生纤维素类干物质 101吨以上 4]。利用纤维素酶的水 技术有限公司测序。 解作用，将纤维素转化为可利用的糖液，再进一步 (2)酶活测定 转化为能量物质(酒精、氢气等)、饲料成分(单糖、菌 内切葡聚糖酶(Cx)活力测定的方法 ：参照文献 体蛋白)等，对缓解全球能源危机 、食 品和饲料资 【12]稍作改进：取1．5mL0．05mol／L醋酸缓冲液配制的 源紧张以及环境污染有着重大意义 5【~。目前研究 1．0％羧 甲基纤维素钠溶液，加入0．1mL经5000rm／in 最多的是具有产纤维素酶能力的微生物(细菌、放 离心10min所得的粗酶液 ，50~C反应20min，用DNS 线菌、真菌等)，特别是真菌 ¨。1，产酶效率高 ，所 法Il测定反应后还原糖(葡萄糖)含量，同时做空白 产的纤维素酶多为胞外酶 ，便于分离和提取。但 多 对照扣除本底。酶活的定义为上述条件下，lmL粗 侧重于真菌菌株对可溶性纤维素或经耗资较大 的 酶液1min催化底物生成lgmol葡萄糖的酶量为一个 物理 、化学等方法预处理后的不溶性纤维素 的作 酶活力单位 “IU”。 用，而对未经处理的天然纤维素的作用研究较少， 滤纸酶(FPA)活力的测定：将新华1号滤纸(1cm 远不能满足人们利用 自然界 中大量存在 的天然纤 X6cm)用 1％的醋酸溶液浸泡一昼夜除去淀粉，用 维素源，特别是农作物秸秆的要求 。因此 ，筛选高 碘液检验，再用2％的NaHCO溶液洗至中性，晒干 效利用天然纤维素的菌株，研究其产酶条件并应 后卷成小卷，放进试管内，加入 1．5mLHAC．NaAC 用于生产是一项有意义的工作。本文选用秸秆 中 缓冲液(pH4．8)，再加入0．5mL酶液，轻轻摇匀，使 筛选获得 的一株能作用于稻秆的丝状真菌 ，对其 滤纸完全浸泡在液体中。在50~C温度下保温30rain 产酶条件进行 了研究。 后，按DNS法测定还原糖(葡萄糖)。以国际单位为