丹酰L苯丙氨酸和L苯丙氨酸对小牛肠碱性磷酸酶抑制作用动力学的比较性研究.pdfVIP

VoL 第29卷，第10期 光谱学与光谱分析 29，No．10，pp2820—2823 0 and October，2009 20 9年l0月 SpectroscopySpectralAnalysis 丹酰一L一苯丙氨酸和L一苯丙氨酸对小牛肠碱性磷酸酶 抑制作用动力学的比较性研究 Buchet2 李丽娜1’2，吴玉清¨，Ren6 1．吉林大学超分子结构与材料国家重点实验室，吉林长春130012 2．Universit∈de CNRSUMR5246 Lyon，Villeurbarme，F-69622，France 摘要利用紫外分光光度法揭示了丹酰一L．苯丙氨酸对小牛肠碱性磷酸酶的选择性抑制作用，并比较件地 研究了丹酰一L_苯丙氨酸和L-苯丙氨酸对小牛肠碱性磷酸酶的动力学抑制过程。结果表明在37℃和碱中}磷 酸酶工作的最佳pH值(pH10．4)的条件下，丹酰一L-苯丙氨酸与L-苯丙氨酸类似，能够有效抑制小牛肠碱性 磷酸酶的活性；利用双倒数曲线拟合，判定丹酰一L_苯丙氨酸与L．苯丙氨酸的抑制类型均为反竞争性抑制， 两者的抑制常数Kt均为mmol级。对丹酰一。苯丙氨酸抑制小牛肠碱性磷酸酶的作用研究，不仪有助于进一 步阐明L，苯丙氨酸对组织特异性碱性磷酸酶的选择性抑制机理，而且丹酰基团的存在也为荧光标定碱性磷 酸酶的特效抑制荆提供了可能。 关键词碱性磷酸酶；丹酰；L-苯丙氨酸；抑制；反竞争性 中图分类号：0657．3文献标识码：A J10—2820—04 DOI：10．3964／j．issm1000-0593(2009 引 言 1材料和方法 碱性磷酸酶(Alkaline E．C．3．1．3．1)广泛I．1主要试剂 Phosphatase 存在于自然界的各类物种中，包括细菌、哺乳动物、爬行动 丹酰一L-苯丙氨酸、丹酰一L-色氨酸、丹酰一L-丝氨酸以及 物、两柄动物、线虫类和昆虫类等[1]。不同的碱性磷酸酶均 猪肾中提取的组织非特异性碱性磷酸酶(TNAP)为Sigma公 intestinalalkaline 以同型二聚体的形式存在，每个单体的活性位都有两个 司产品；小牛肠碱性磷酸酶(calf Phospha— Zn2+和一个M92+。在碱性条件下，碱性磷酸酶不仅能够水 解磷酸单脂产牛磷酸，从而调节生物体内的磷代谢，同时它 (pNPP)，哌嗪，双甘氨肽均为Fluca公司产品。其他实验试 还具有焦磷酸酶的水解活性，可以水鳃体内的核营酸心J。哺 剂均为商品化的高纯度样品。 乳动物的碱性磷酸酶分为组织特异性和组织非特异性碱性磷 1．2实验方法 mmol· 酸酶两大类。其中前者的氨基酸序列有90％～98％是同源 碱性磷酸酶(TNAP和CIAP)的活性在含有25 的[3]，主要分布在小肠、胎盘和生殖细胞中。由于碱性磷酸 L-1哌嗪，25mmol·L-1双甘氨肽以及5mmol·L_1氯化 酶是通过磷脂酰肌醇锚定在细胞膜表面[4]，从而对维持细胞 镁、pH10．4的缓冲溶液中测定。测试溶液0．99mL由缓冲 的正常活动起着重要的生理作用。临床研究表明，很多疾病 溶液，0．4U·n1L_1酶和一定浓度的抑制剂组成，溶液充分