乌拉尔甘草转鲨烯合成酶基因毛状根系研究.pdfVIP

第 34 卷第 15 期 Vol. 34 , Issue　15 2009 年 8 月 　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　　Augu st, 2009 乌拉尔甘草转鲨烯合成酶基因毛状根系研究 1, 3 2 3 3 卢虹玉 , 刘敬梅 , 张海超 , 高山林 ( 1. 广东海洋大学 食品科技学院 , 广东 湛江 524045; 2. 国家作物分子设计中心 , 北京 100085; 3. 中国药科大学 遗传育种教研室 , 江苏 南京 2 10038) [摘要 ] 　目的:为了研究甘草酸的合成调控途径及提高甘草酸合成水平 。方法 :将已克隆的乌拉尔甘草鲨烯合成酶基因 ( ) GuSQ S1, GenB ank登录号为 : AM 182329 通过发根农杆菌 A g robacterium rh izog enes A4 的介导 ,转化甘草下胚轴并诱导毛状根 - 1 ( ) 的形成 。建立的毛状根系经 08 m g ·L 的除草剂 PPT 抗性筛选 、PCR 和 Southern b lotting检测分析后 ,得到的转基因毛状 ( ) 根系经 HPLC检测甘草酸 GA 含量 。结果与结论 :转基因毛状根中甘草酸的最高含量约为野生型毛状根的 36倍 。 [关键词 ] 　甘草 ;鲨烯合成酶 ;甘草酸 ;转基因毛状根 ( 　　甘草是我国重要的传统中药 ,包含多种化合物 , 建好的含有甘草鲨烯合成酶基因 GuSQ S1, Gen 其中三萜类化合物甘草酸是主要药用成分 , 除作药 ) ( B ank 登录号为 : AM 182329 的植物表达载体 130 / 用外 ,它在食品、化妆品、烟草加工等方面也有广泛 35 SGuSQ S1) , 通过快速高效的 R i质粒介导转化 的用途 。随着其功能被不断开发利用 ,世界对甘草 体系转入甘草毛状根中 , 获得转基因甘草毛状根 , 的需求量剧增 。由于对野生甘草的过量采挖造成了 并检测甘草酸含量 。 资源濒乏 ,因此急需找到一种行之有效的方法能够 1　材料 在短周期内获取大量甘草酸来满足社会需求 。 1. 1　植物 　甘草种子来自内蒙古 ,经中国药科大学 关于甘草的组织和细胞培养方面的研究国内外 丁家宜教授鉴定为甘草 Gly cy rrh iza u ra lens is F isch. 已有不少报道 , 然而多数研究报道在甘草细胞培养 1. 2　菌株和质粒 　发根农杆菌 A4 含 R i质粒 ,野生 中没有甘草酸产生 。近年来随着中药生物技术的不 型无抗性标记 ; 构建好 的植物表达