人胎儿肝干细胞的分离及鉴定.pdfVIP

维普资讯 268 TianjinMedJ，May2005，Vol33 0l5 人胎儿肝干细胞的分离及鉴定 张金卷 杜 智 李 涛 朱争艳 王毅军 聂福华 宋继昌 摘要 目的：探索人胎儿肝干细胞的分离及鉴定方法。方法：改进Seglen胶原酶(Iv型)原位灌注结合Percoll密 度梯度离心分离纯化4-6个月水囊引产男性胎儿的肝干细胞，CO培养箱培养 ，光镜 电镜下观察细胞特点 ，进行肝 干细胞细胞标志SABC免疫组化染色。结果：平均细胞产量 (2．10±0．50)X107，细胞活性率为(92．30±1．23)％。光镜下 呈游离状态、大小不等的单个细胞，约为正常肝细胞 1／5～1／3大小；电镜下细胞表面可见少量短而小的微绒毛状突 起，卵圆形细胞核 ，核／浆比例较大等特点 ；甲胎蛋白．细胞角蛋白8、l9及 —l一抗胰蛋白酶免疫组化染色呈阳性，白 蛋白及白细胞共同抗原染色呈阴性表现，培养3周可形成克隆样结构。结论：改进的Seglen胶原酶原位灌注结合 Percoll密度梯度离心法可成功分离、纯化人胎儿肝干细胞。 关键词 胎儿 肝 干细胞 细胞分离 免疫组织化学 IsolationandIdentificationofHumanFetaIHepaticStem CelI ZHANGjinjuan，DUZhi，LITao，ZHUZhengyan，WANGYijun，NIEFuhua，SONGJichang HepatobiliarySurgeryDepartment．ThirdCeruralHospitalofTianjin,ArtificialCellEngineeringTechnology ResearchCenterofPublicHealthMinL~try,Tianjin30017o,China AbstractObjective：Tostudytheisolation，purificationandidentificationofhumanfetalhepaticstemcells (HSCs)． Methods：HumanfetalHSCswereobtainedfrom liverinabortionfetusinthesecondtrimesterofpregnancy．Livercellswere isolatedbycollagenase(typeIV)digestionmethod，nadpurifiedbyPercollgradientcentrifugation．ThemakersofHSCswere identifiedbyimmunohistochemicalstaining．Results：ThepurifiedhumnafetalHSChadayieldof(2．10±0．50)x10。andthe viabilitywasf92．30±1．23)％．ThediameterofcellsWaSlessthna 1／3ofthenormalhepatoeytesunderphasecontrastmicro— scope．Theelectronmicroscopicexaminationshowedthattherewereprotrudingmicrovillionthesurface，ovalshapednuclei nadhighnuclear／cytoplasmratio．Therewerecytokeratin(CK)8，CKl9，alpha-fetoprotein(AFP)andalpha-1一natitrypsin (AAT)positiveinstemcel1．TheAlbuminandleucocytecommonnatigen(LCA)werenotstainedinHSCs．Theisolatedcell couldclonallyproliferatenadfo