悬浮培养的铁皮石斛原球茎在固体培养基上生长和分化的研究.pdfVIP

维普资讯 第30卷第 lO期 中 国 中药 杂 志 Vo1．30．Is e l0 2OO5年 5月 ChinaJournalofChineseMateriaMediea May，213O5 · 研究论文 · 悬浮培养的铁皮石斛原球茎在固体培养 基上生长和分化的研究 侯丕勇，郭顺星 (中国医学科学院 中国协和医科大学 药用植物研究所，北京 100094) [摘要】 目的：对悬浮培养的铁皮石斛原球茎在固体培养基上的生长和分化状况进行研究，以解决原球茎转 接成活率低的问题。方法：选用不同基本培养基、碳源、培养基 pH和激素，以生长鲜重和成苗数为指标，考察原球 茎的生长和发育。结果与结论：降低固体基本培养基元素的含量有利于原球茎的生长，但不利于原球茎的分化。 NAA，IAA，IBA和GA有利于原球茎的生长与分化，而偏酸的培养基 pH和灭活的真菌不利于原球茎的生长与分化， 灭活真菌容易引起原球茎的形态变异。 [关键词] 铁皮石斛；原球茎；生长；分化 [中图分类号】S567 [文献标识码】A [文章编号】1001．5302(2005)10-0729-04 铁皮石斛DedrobiumcandidumWal1．eXLm．dl。是 1／2MS，全 1／2MS和 67一V培养基。1／2MS为MS培 《中国药典)2ooo年版一部收录的5种药用石斛之 养基大量元素减半，全 1／2MS为MS培养基全部元 一 。 其栖息地范围狭窄，野外生长周期长，资源十分 素减半。培养基都含有20％马铃薯提取液 +3％蔗 有限，需要利用人工组织培养的方法解决药源问题。 糖 +0．9％琼脂，pH5．8。 作为兰科植物，铁皮石斛在组织培养过程中往往产 1．2．2 碳源选择试验 分别采用蔗糖和葡萄糖， 生大量的原球茎，原球茎可以分化为幼苗，发育成成 用量均为3％。 熟的植株n．2J。液体悬浮培养可以激发原球茎迅速 1．2．3 培养基 pH考察试验 培养基酸碱度采用 大量地增殖和分化L3j，对于原球茎的复壮培养有很 pH5．3，5．8，6．33个浓度。 好的作用，同时也有利于优 良品种的单一胚系筛选。 1．2．4 激素试验 本组实验的培养基中不添加马 另外，采用液体和固体相结合的循环培养的方法，不 铃薯提取液。选用的激素及其使用含量分别为： 仅可以缩短培养周期，还可以使得那些没有发育成 NAA，IBA，呲 ，2，D，ZT，GA均为 0．5nag·L～，KT 植株的培养物作为接种源循环到下一个周期中，激 和BAP为0．2mg·L～。以不添加激素的培养基为 发增殖和分化，有效利用培养物，节约培养成本。但 对照培养基。 液体培养的原球茎转到固体培养基上的生长和分化 1．2．5 真菌添加物试验 选用2种从云南野生铁 还受很多因素的影响，需要进一步研究解决。作者 皮石斛中分离的真菌h14和h24作为实验菌株。菌 就此问题展开研究。 株接种到液体麦麸培养基中(麦麸30g，葡萄糖 2o 1 材料与方法 g，MgSO41．5g，KH2PO41g，蒸馏水配成 1000mE)培 1．1 材料 养2～3周，菌丝体和发酵液一起匀浆后，灭菌，以 实验材料为悬浮培养于67一v液体培养基的铁 5％的添加量加人固体培养基中使用。以没有添加 皮石斛原球茎。 真菌的培养基为对照，接人原球茎进行实验。 1．2 方法 1．2．6 培养条件和实验指标的测定 除非特别指 1．2．1 基本固体培养基试验 培养基采用 MS， 出，固体培养采用的基本培养基为 1／2MS+20％马