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第五章中药制剂中各类成分分析第二节 黄酮flavone类成分的分析 目的要求 了解黄酮类的理化性质，熟悉黄酮类定性鉴别。 掌握中药制剂内黄酮类的供试液的提取纯化制备方法、定量测定的原理和方法。 一、概述 二、理化性质 1、物理性质：晶形大多完好。 2、旋光性 苷元：二氢黄酮、二氢黄酮醇、二氢异黄酮、黄烷醇类因含手性Ｃ，均具旋光性，其它类不具旋光性。 苷：均具旋光性，且多左旋。 3、酸碱性 γ吡喃环O→弱碱性 酚羟基→呈酸性 ４、溶解性 游离黄酮：难溶于水，较易溶于MeOH, EtOH, EtOAC, Et2O. 黄酮苷：可溶于热水, MeOH, EtOH, EtOAc等强极性及中极性溶媒。 　 难溶或不溶于弱极性有机溶媒中Et2O、CHCl3、C6H6。 ∴对于含黄酮类成分的制剂，常用醇来提取制备样品液。 ５、显色反应 （1）还原反应 Ⅰ、盐酸－镁粉反应 Ⅱ、盐酸－锌粉反应 阳性：只有二氢黄酮醇类 黄酮及黄酮醇类常不呈色。 Ⅲ、钠汞齐还原反应 显红色：黄酮、二氢黄酮、异黄酮、二氢异黄酮； 显黄～淡红色： 黄酮醇类； 显棕黄色： 二氢黄酮醇类。 Ⅳ、四氢硼钠还原反应 阳性：二氢黄酮及二氢黄酮醇。 　　　-----可用于薄层呈色。 (2)与金属盐类试剂的络合反应 检出：C3-OH, C4=O； 　　　　C5-OH,C4=O； 　　　　或邻二酚OH黄酮类成分 Ⅰ、锆盐－枸橼酸显色反应 黄色不退　示有C3-OH 黄色消失　示有C5-OH Ⅱ、氨性氯化锶显色反应 阳性：检出含邻二酚羟基黄酮化合物。↓黑色。 Ⅲ、醋酸镁、三氯化铝显色反应 可用纸或薄层显色，紫外灯下观察荧光。 三、黄酮类成分的定性鉴别1、化学显色反应鉴别 常用： 还原反应 金属盐类试剂 络合显色反应等。 (1)还原反应Ⅰ、盐酸－镁粉反应 检识黄酮类成分的最常用方法之一。 A、原理：黄酮类成分经还原后生成花色苷及其二聚物，呈红色。 注意： a、C3－OH黄酮类为阳性，若H被取代则阴性； b、花色素类、部分噢弄、查耳酮类遇浓HCl产生红色，可用不加镁粉的对照试验排除。 B、操作步骤 a、适当方法提取分离制备样品液，常用乙醇、甲醇、EtOAc为溶媒。 b、取样品液1～5ml＋少许镁粉→振荡→＋浓HCl数滴→呈红色 c、建立方法与考察干扰情况时，需作对照(阴性、假阳性)。 ?D、结果 阳性：呈橙至红色。说明可能有黄酮、黄酮醇及其二氢化合物存在。 D、举例 如：药典中牛黄解毒片、清喉咽合剂、葛根芩连片中都含有黄芩。 黄芩：含黄酮类化合物，主要为黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、黄芩新素Ⅰ、Ⅱ等，且具Ｃ5OH, 黄芩素及其苷具邻二酚OH。 ∴可用还原反应及与金属盐类试剂的络合反应定性鉴别。 例1 清咽合剂的定性鉴别： 合剂5ml＋EtOAC5ml→萃取→分取酯层→水浴蒸干→＋甲醇2ml溶解→＋镁粉、盐酸3～4滴→显红色。 结论：阳性。 若：合剂5ml＋EtOAC5ml→萃取→分取酯层→水浴蒸干→＋甲醇2ml溶解→盐酸3～4滴→显红色。 结论：假阳性。 例2 牛黄解毒片的定性鉴别方法 取６片去衣＋乙醇10ml→△10min→滤液→取滤液1～5ml＋少许镁粉→振荡→＋浓HCl数滴→△→呈红色。 结论：阳性。 取６片去衣＋乙醇10ml→△10min→滤液→取滤液1～5ml＋浓HCl数滴→△→呈红色。 结论：假阳性。 (２)与金属盐类试剂的络合反应 Ⅰ、锆盐－枸橼酸显色反应 举例：银黄注射液的定性鉴别 --银黄注射液1.0ml+5%亚硝酸钠,10%硝酸铝液各0.30ml→↓阳性 --银黄注射液0.1ml+水10ml→取此稀释液2.0ml→+2～5%ZrOCl2 2滴→显色→＋2％枸橼酸甲醇液→褪色。 ２、纸色谱法３、薄层色谱鉴别 TLC是含黄酮类成分制剂最常用的定性方法。 硅胶薄层色谱：分离弱极性化合物较好； 聚酰胺薄层色谱：分离含游离酚羟基的黄酮及苷颇为理想； 纤维素薄层色谱：适于分离多糖苷混合物。 (1)硅胶薄层色谱 Ａ、原理：用硅胶分离黄酮类－－遵循正相色谱层析规律；化合物极性越强，所需溶剂极性越大。其Ｒf 值顺序如下: RCH3 ＞RH＞ROCH3 ＞R-O-糖＞ROH Ｂ、常用的溶剂系统有：其配比可根据需要加以调整。 甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5：4：1）：黄酮苷元； 苯-甲醇（95：5）：黄酮苷元； 苯-甲醇-乙醇（35：5：5）：黄酮苷 氯仿-甲醇（8：2）：黄酮苷元及苷 甲苯－甲酸乙酯－甲酸（5：4：1）： 双黄酮 Ｃ、举例１愈风宁心片 主要组成为葛根，定性检出葛根素。 第一步：制备供试样品液：取片，去衣，研细，甲醇提取。 第二步：点样：将供试样品