DNA聚合酶高保真机理的新发现及其在SNP分析中的应用.pdfVIP

遗 传 ! !# $ 技术与方法 !#$%’( )*++- !! !# !$%!’ ! ,. ! L7M聚合酶高保真机理的新发现及其在 ,7C分析中的应用 ! )! ) ! ! % ( ) ( 陈琳玲 !张 佳 !彭翠英 !廖端芳 !李弘剑 !高汉林 !李 凯 ! ! ! ! 津脉公司$天津 + 南华大学 研究所$衡阳 + 暨南大学生命科学与技术学院$ )H %)#! !H ,7C (!))%H 广州 + 希望城国家医学中心$加利福尼亚$美国 ’)+%! (H 摘 要!高保真L7M聚合酶在遗传与进化等生命活动中具有十分重要的生理与病理意义*高保真聚合酶除具有广 ! 为人知的校正功能外$最近的实验进一步表明$由不能及时校正或难于纠正的错配碱基引发的%关闭L7M聚合反 应的效应$同样保证了L7M聚合反应终产物的纯度*高保真聚合酶这一%关闭L7M聚合反应的能力$促成了其 与耐外切酶消化的 末端碱基特异性引物共同构成一个 敏感性纳米级复合分子%开,关$高保真聚合酶分子 %N ,7C 中相距三纳米的聚合中心和 外切酶酶解中心则既合作又独立地起到了复合分子开关中%开和%关的效能# %N ’N 对于配对的引物$则直接在该酶的聚合中心进行聚合反应$即%开的效应+而对于 末端错配的引物$则从该酶的 %N 聚合中心转移至 外切酶的酶解中心$由于引物修饰了的 末端耐外切酶的特点$继而出现了一种长时间无 %N ’N %N 酶解产物的酶解过程$最后因酶的聚合中心空转而%关闭 L7M聚合反应$即%关的效应*这一新的复合分子 %开,关在很大程度上满足了后基因时代对 ,7C分析的要求*该,7C分子开关的应用$使基因诊断提高到单碱基 水平*同时$利用该方法通过,7C对基因组扫描$在单基因遗传病病因研究及法医学鉴定上具有很强的理论和实 用价值* 关键词! 聚合酶+校正+分子开关+单碱基多态性 L7M 中图分类号! 文献标识码! 文章编号! ! O’ M !’%P#! !’ !P!#P’ ! ! ! ! ! ! !#$%$’()*+,- ./012*3’%$),$.4%-$6),$+*)+*7$*)*’$ 5 .8!9 :$ %+’)7+*+=$%+7 )*=7,9 %+’)7+*+*?!49,,) ; 5 ;; 5