HPRT基因突变的分子图谱及检测方法学.pdfVIP

维普资讯 国外医学卫生学分册 2000年 暂27卷 第 1靳 f一 013 HPRT基因突变的分子图谱及检测方法学 殴 一 i ■ 芝 (第三军医大学期防医学 亲分子毒理室，重庆 400038) 摘要 ： HPRT基 因编码产生参与细胞 内嘌 呤补救代谢途径的关键酶 ，由于其本身所具有的一些独特性质 · 逐渐成为基因突变 、基因定位与基 因转移研究中的重要靶基困之一。本文舟绍了HPRT基 因的丹于结构 、基 因突变检测的分子生物学技术、HPRT基因突变谱 及分子突变机制魄研究现状，并展望了其发展前景。 关键调 ： HP ． RT~ ；突变；PcR 荔目穿≮ 磅古．圄镰 尸： 中圈分类号 ： Q754 文献标识码 ： A 文章编号 2000)01—0051—013 HPRT基 因编码 产生次黄嘌呤鸟嘌呤 HPRT 基 因定位于 X性染色体长臂远 磷酸棱糖基转移酶 (HPRT)，此酶参与细胞 端 q 区域 ，在雄性细胞 中为半合子 ．而在 内嘌呤补救代谢途径 ，它的缺乏或活性降低 雌性细胞 中则表现为一条 x染色体失活 ，所 会引起核酸代谢异常，导致出现遗传性疾病 以它在功能上也是半台子 ，突变 即可表现 出 (痛风、自毁容貌综合征等) 。而在体 内外 来 用小 鼠HPRT 细胞和人 x 常染色体 易 的致 突变 研 究 中，如 果 受试 物 诱 导 细 胞 位 (如 x／9、X／22等)细胞杂交 ，证 明此基 因 HPRT基因发生突变 ，该酶活性将降低或彻 与其它 x连锁基因的顺序依次为 (按距离着 底失活 。而在加入足 以使正常细胞死亡量的 丝粒近远)：磷酸甘油酸激酶 (PGK)基因 、一 碱基类似物 (如 6硫代鸟嘌呤、6TG)的培养 半乳糖苷酶 (CAL)基 因、焦磷酸核酸合成 基 中只有 HPRT基因突变体细胞能够继续 酶 (PPRP)基 因、HPRT基 因、x连锁表面抗 生长，通过计算突变频率即可反映受试物的 原 (SAX)基因、6磷酸葡萄糖脱氢酶 (G6PD) 致 突变性 ，由此建立 了HPRT基 因突变试 基因。另外，HPRT 基 因还和 单胺 氧 化酶 验 。迄今为止，国内外已广泛地将这一实验用 (MAO)基 因紧密连锁 。 于化合物对基因致突变作用的研究。筛检和 Jolly等-报道 了人类HPRT基因编码 评价了许多可疑化合物 。。。近年来，随着分 区的核苷酸顺序 。他们在 cDNA文库中对 53 子生物学技术 的迅速发展 ，HPRT基因的核 个独立 的HPRT特异克隆进行测序 ．从 mR 酸全序列已经测定，目前 已有许多方法可检 NA翻译的 HPRT蛋 白质中推测出 以首先 测 HPRT基因的分子突变谱 ，从而将HPRT 出现的AUG 密码子为起点，以第一一个 UAA 基因突变研究深入到分子水平 。本文结合国 密码子为终点的 “阅读框架”，发现整个编码 际上对 HPRT基因的分子结构 、致突变检测 区为 654bp，与设想的HPRT蛋 白质编码 区 的方 法学、分子突变谱 以及突变机制的研究 相 符 合；利 用 DNA 探 针 已确 定 人类 进展作一综述 。 HPRTraRNAg0 的核苷酸序列，根据这 一 编码 医核苷酸顺序预测 的氨基酸顺 序 (21