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第 30卷 第4期 农 业 与 技 术 v01．30 No．4 · 67· 2010年 8月 AgricultureTechnology Aug．02 10 RNAi在哺乳动物中的研究新进展 唐中伟 冯亦平 (山西农业大学生命科学学院。山西 太谷 030801) 摘【 要】RNA干扰 (RNAinterference，RNA~)是一种高度保守的、基于RNA水平的特异性降解机制，它通过特异性地抑制基 因的表达来快速、简便以及大规模地鉴定基因的功能。虽然dsBNA不能应用于哺乳动物，但是小分子干扰型RNA (siP,Na)的技术 却证明RNAi可以成功应用于哺乳动物。近年来，RNAi技术在哺乳动物中得到了飞速发展和广泛应用，包括设计更加合理、更加 有效的siRNA，在更多的已经分裂或者尚未分裂的细胞系中诱导RNAi 通过瞬时RNAi或转基因RNAi在活体动物中抑制基因的表 达，建立时空调控或组织特异性的RNAi以及利用RNAi对哺乳动物基因组功能进行大规模的筛选和鉴定。本文对近几年RNAi在哺 乳动物 中的研究新发展进行综述 。 【关键词】RNA干扰；siRNA；哺乳动物；基因功能 中闺分类号：Q752 文献标识码：A 慨 干扰 (RNAinterfel~llCe，RNAi)是一种 22nt的小分子干扰型 RNA (smallinterferingRNA， 从低等到高等动植物中都高度保守的、基于RNA siRNA)能够在哺乳动物细胞中诱导有效的RNAi 水平的特异性降解机制。RNAi技术通过特异性地 而不诱发干扰素反应。随后的一系列研究为 RNAi 抑制生物体内源功能基因的表达，借助于突变表 这个原则上可以沉默任何基因的技术在哺乳动物 型或生理生化指标的变化来反映该基因的功能。 的基因功能方面的广泛研究开启了新的篇章。本 随着基因组测序工作的完成，RNAi为从基因到功 文对这些新近进展进行了介绍，这些进展包括设 能的反向遗传学途径提供了功能研究的桥梁，现 计更为有效的siRNA、在动物体内和体外建立有 已发展成一种快速、简便以及周期性短的分析基 效的RNAi、条件性诱导RNAi以及利用RNAi对哺 因组功能的强大工具。在线虫、果蝇和植物中， 乳动物基因组功能的大规模筛选和鉴定。 RNAi技术已被广泛应用于分析和鉴定基因组功 能。 1 机制 在哺乳动物中，研究基因组功能最为常用的 方法是通过同源重组进行基因打靶 (Genetarget) 随着对 R_NAi研究的生化和遗传学证据积累 从而来达到基因敲除 (Knockout)的目的…，但 的增加，RNAi机制也得到进一步阐明。现在研究 是这种方法费时费力并且也不适用于那些胚胎干 发现不同种类生物的 RNAi可 以由不同类型的分 细胞没有建立的动物。尽管核酶 (mbozyme)和 子所诱导，这些分子包括长模板 dsRNA、质粒 反义 RNA (Antisense砌 )技术也可用于进行哺 DNA表达的短的发夹 RNA (hairpinRNA)以及 内 乳动物的基因功能分析2【]，但它并不能普遍应用 源的micmRNA (miRNA)，它们在体 内被～类似 于哺乳动物的基因组功能研究。而在线虫、果蝇 RNAse—m的Dicer酶降解成 siRNA[5J，随后 siRNA 和植物中应用很成功的长双链 I-hNA (29bp)在 与 RNAase,结合形成 RNA诱 导 的沉默复合体 哺乳动物中又不可避免地通过诱导干扰索途径造 (RNA inducedsilencingcomplex，R．kSC)