RNA干扰及其在哺乳动物细胞研究中的应用X.pdfVIP

重庆医学 2003 年 11 月第 32 卷第 11 期 1557 ·综 　　述· RNA 干扰及其在哺乳动物细胞研究中的应用 曹廷兵 综述 ,叶治家 审校 (第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室 ,重庆 400038) 　　关键词 :RNA 干扰 ;双链 RNA ;转录后基因沉默 ( ) 中图分类号:Q5226 文献标识码 :A 文章编号 : 2003 ( ) 　　RNA 干扰 RNA interference ,RNAi 最初被认为是一种存 间产物的报道。2000 年 ,Zamore 、Hammond 、Yang 和 Parrish 等 在于牵牛花和其他一些植物的奇特现象 ,如今成了分子生物学 发表许多论文 ,表明在 RNAi 实验中加入的 dsRNA 首先被降 的研究热点之一。近几年的实验表明 ,RNAi 是普遍存在于动 解成 21～25nt 小片段 dsRNA , 随后在小片段 dsRNA 的引导 植物体内抵抗病毒感染和限制转座子运动的一种自然存在的 下 ,由核酸内切酶将同源 mRNA 降解成 21 ～25nt 的片段 ,首 防御机制 ,并且对其发生机理已有初步认识。RNAi 就是通过 次显示了 dsRNA 介导的基因沉默是一个两步降解反应。 导入一段与内源基因同源的双链 RNA ( double stranded RNA , Wianny 等在小鼠胚胎中 ,Svoboda 等在小鼠的卵母细胞中 dsRNA) ,使内源性的 mRNA 降解 ,从而引发同源基因转录后 完成了 RNAi 实验 ,预示了 RNAi 技术有可能应用在哺乳动物 ( ) 基因沉默 posttranscriptional gene silencing , PTGS 的过程 ,作 细胞上。令人振奋的是 Elbashir 等报道 ,将人工合成的 3′末端 为一种特异的基因沉默或封闭方法已在各种有机体的研究中 带有 2 个突出核苷酸的 21nt dsRNA 导入到人胚胎肾细胞和 使用[ 1～3 ] 。那么 RNAi 是如何发现的 ? 发生机理又是什么 ? HeLa 细胞 ,产生了特异性的 RNAi ,证明了 dsRNA 在哺乳动物 更为重要的是它如何在人类功能基因组学实验研究中运用 ? 中也能诱导产生特异性的基因沉默。而此前 ,人们认为在哺乳 现将近年的有关研究进展作一综述。 动物细胞中不能产生特异性的 RNAi 。因此 ,Elbashir 等的实验 1 　RNAi 现象的发现及其研究历程 显示了 RNAi 技术在医药开发和基因治疗等方面广阔的应用 1992 年 ,Rich 等为了加深牵牛花的紫色 ,把一种含有强起 前景。 动子的紫色色素基因导入牵牛花后 ,不但预期的深紫色没有出 2 　RNAi 的生物化学机制 现 ,反而出现了各种杂色 ,甚至是白色。Rich 等就把观察到的 导入的 dsRNA 是如何诱导基因沉默的呢 ? 为