大肠埃希菌植物毒素Gelonin核心功能区表达和纯化及抗肿瘤活性研究.pdfVIP

中华肿瘤防治杂志2008年9月第1鲞箜 !塑 旦! 垒 垦曼 垦垦 !垦垦垒：：墨望!! !! ! I． ：! 《实验研究l 大肠埃希茵植物毒素 Gelonin核心功能区 表达和纯化及抗肿瘤活性研究 牛作兴 ， 刘爱军 1．山东省肿瘤 医院内科 ，山东 济南 250117 2．解放军总医院病理科 ，北京 100853 Expression，purificationandanti—tumoractivityofcorefunctionalfragmentofplanttoxinGelonin NIUZuo一：ring ，L儿 Ai—jun 1．DepartmentofOncology，ShandongTumorHospital，Jinan250117，P．R．China 2．DepartmentofPathology，PLAGeneralHospital，Beijing100853，P．R．China 【摘要】 目的：在大肠埃希茵 中表达纯化 [ABSTRACT] OBJECTIVE：Toexpressandpurifycorefunctional 植 物 毒 素 Gelonin核 心 功 能 区 △Gel fragmentofplanttoxingeloninandinvestigateitsanti——tumoractivi—。 (S8一K200)，并研 究其抗肿瘤活性 。方法 ： ty．METHODS：TheencodingfragmentofA Gel(S8一K200)wasam 以 pET30a(+)Gelonin为模板 ，采 用 PCR plifiedby PCR with pET30a(+ )一Gelonin as template．The PCR 方法扩增△Gel基 因，克 隆插入 pEASY_B productwasligated with pEASY—B vectorand thensubcloned into 载体 ，测序鉴 定后插入 pET30a(+)载体 ， pET30a(+ )vectorafterconformationbysequencing．Theexpres— 转化感受态细胞 BI2l(DE3)pIysS，诱导表 sionvectorpET30a(+ )一 △Gelwastransformed intoE．coliBL21 达并纯化 目的蛋 白，并观察其抗肿瘤活性 (DE3)pLysS．ThetargetproteinA GelwasinducedandpurifiedSO 和细胞毒性。结果 ：AGe1(S8K200)目的 astoinvestigateitsanti—tumoractivityandcytotoxicityinvitro．RE— 基 因的大 小约为 600bp，SD PAGE 电泳 SULTS：Thesizeofencodingfragmentof△ Gel(S8K200)wasabout 显示 目的蛋 白的大小约为 27×1O。，体 外实 600bpandSDSanalysisindicatedthatthemolecularweight 验结果显示 ，△Gel和 Gelonin对肿 瘤 细胞 oftargetprotein wasapproximately 27× 10。． Both Gelonin and 系HI，60具有 明显的杀伤作用，而对正常 △Gelsignificantlyinhibited thegrowth oftumorcelllineHL6O， 人胚肺细胞系wI一38毒性极小。结论：Ge andlittlecytotoxicitytonormalcellsW I一38wasobserved．CONCLU- lonin核心功能区△Gel保持 了Gelonin毒 SIoN：TheseresultsdemonstratethatAGel(S8一K200)remainfully 素蛋 白全部的抗肿瘤活性，具有很好的开 anti—。tumor act