平喘类中成药—氨茶碱、茶碱的测定—高效液相色谱质谱联用法.pdfVIP

快速液相色谱法测定黄连类药材中四种生物碱成分的含量 1 范围 本方法采用快速液相色谱法测定黄连类药材中的小檗碱、巴马汀、药根碱和黄连碱。 本方法适用于黄连类药材中小檗碱、巴马汀、药根碱和黄连碱的含量测定。 2 实验材料和仪器 2.1 试剂（除特殊注明外均为分析纯试剂） 甲醇（色谱醇）、乙腈（色谱醇）、磷酸二氢钠。 2.2 仪器设备 Agilent 1200 系列高分离度快速液相色谱系统(RRLC)，配有二元泵、自动进样器、可变波 长检测器（VWD ）。 3 分析条件 3.1 四种生物碱对照品溶液和质控样品（QC ）的制备 分别精密称取对照品盐酸药根碱1.05 mg、黄连碱1.03 mg、盐酸巴马汀3.98 mg、盐酸小 檗碱4.96 mg ，分别置于2 mL 、1 mL、2 mL 、5 mL 量瓶中，用70% 甲醇溶解，制成浓度为0.48 网 mg/mL 药根碱、1.03 mg/mL 黄连碱、1.81 mg/mL 巴马汀、0.90 mg/mL 小檗碱的对照品储备液。 分别取不同体积的各对照品储备液，置于同一量瓶中，用70% 甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀， 得系列浓度工作溶液。质控样品也按上述操作制成低、中、高三种浓度的混标。 3.2 色谱分析条件 析 色谱柱：Zorbax Eclipse Plus-C (4.6 × 50 mm,1.8 μm, Agilent) ；流动相：20 mmol/L KH PO （A ） 8 2 4 -乙腈（B ）体系，梯度洗脱，见下；流速：1.5 mL/min，检测波长：265 nm ；柱温：20 ℃； 进样体积：1 µL。 分 t (min) B% 0 22 2 22 2.5 急30 3.5 30 3.3 黄连类药材供试品溶液的制备 称取黄连药材粉末约40 mg ，置于10 mL具塞试管中，加入10 mL 70%甲醇，称重，60℃ 温浸 30 min ，超声提取30 min，放冷至室温，补足减失的重量，4500 rpm 离心5 min，取上 应 清液，经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。 4 方法确认 4.1 色谱图 国 根据建立的RRLC 条件分析，得到四种生物碱对照品和样品供试液的色谱图。 4.2 最低检测限(LLOD)和最低定量限(LLOQ)的测定 将工作溶液逐级稀释，进行RRLC 分析，记录样品每次测定得到的信号强度与噪音的比 值，信噪比S/N≥3 时的量即为最低检测限(LLOD)，S/N≥10 时的量即为最低定量限(LLOQ) 。 中 4.3 标准曲线和线性范围 将系列浓度的混合对照品溶液，按已建立的RRLC 色谱条件进行测定。分别以药根碱、 黄连碱、巴马汀、小檗碱峰面积的积分值为纵坐标(y)，对应的对照品溶液的浓度为横坐标(x)， 绘制标准曲线，计算药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱的线性回归方程及相关系数（r ）值。 4.4 精密度 用测定日内及日间质控样品浓度变化来验证方法的精密度及准确度，测定低、中、高三 种不同浓度的质控样品，将峰面积带入相应的标准曲线计算浓度，日内精密度实验对同一浓 度的对照品溶液连续测定6次，测定浓度的RSD作为衡量精密度的指标。日间精密度实验中对 不同浓度的质控样品溶液连续测定5天，考察测定浓度的RSD 。 4.5 重复性 取同一份黄连药材粉末6 份，按供试品溶液制备方法操作，依上述RRLC 分析条件分别 进行测定，计算黄连类药材中四种生物碱平均含量的RSD(%) 。 4