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214 中国科学 C 辑 生命科学 2005, 35 (3): 214~219 鸡类囊胚获得及其生物学特性研究* 李 佳 潘求真 李俊英 韩红兵 孙书锋 杨 君 徐曙光 田 亮 连正兴 ** 杨 宁 李 宁 ** ( 中国农业大学动物科技学院; 农业部畜禽遗传育种重点开放实验室; 农业生物技术国家重点实验室, 北京 100094) 摘要 鸡胚是研究胚胎发育 组织分化 基因表达与调控良好的实验模型, 是动物功能基因组 学研究的重要材料. 实验选取白来航蛋鸡所产新鲜种蛋, 采用纸环法收集胚盘, 机械打碎后进行 悬浮培养, 获得了哺乳动物囊胚样结构, 命名为类囊胚. 体外培养 12~24 h 是类囊胚发育的高峰 期, 其直径显著增加近1 倍. FBS 可促进类囊胚的发育, 而卵黄在12 h 前对类囊胚发育没有明显 影响, 但到24 h 时可促进类囊胚的贴壁生长. 经碱性磷酸酶(AKP)染色初步显示类囊胚中含有大 量碱性磷酸酶活性的胚胎干细胞, 胚胎干细胞特异性表面标志 SSEA- 1 免疫荧光染色后呈阳性, 进一步肯定了类囊胚中ES 细胞的存在, 最终从贴壁类囊胚中分化出神经样和成纤维样等多种类 型细胞. 由此可以得出: 悬浮培养鸡胚盘细胞可以形成含有胚胎干细胞的 类似哺乳动物囊胚样 的结构, 并能保持其内胚胎干细胞的特性和分化潜能. 关键词 鸡 胚盘细胞 类囊胚 胚胎干细胞 胚胎干细胞是研究细胞生长与分化机理, 开展 组的重要手段. 功能基因组学研究和进行细胞治疗的首选实验材料, 自首次从附植前胚胎内细胞团中分离出小鼠胚 [2,3] 并逐步成为生命科学中的一个亮点. 禽类胚胎干细 胎干细胞 , 并通过嵌合体制备证明了胚胎干细胞 胞的研究起步较晚, 进展较为缓慢, 有一些学者已经 (embryos stem Cell, ES)可以参与包括生殖细胞在内 [4] 建立了鸡的胚胎干细胞系. 利用胚胎干细胞可以制 的各种细胞类型的形成. 此后, Pain 等人 以小鼠胚 备嵌合体或转基因胚胎干细胞嵌合体鸡, 进行珍贵 胎干细胞为参照, 利用体外培养技术长期培养了鸡 资源的保种和鸡输卵管生物反应器的开发与应用. 的胚盘细胞; 筛选出了胚胎干细胞特有的表面标志 [1] 尽管利用外源DNA 的显微注射法制备了转基因鸡 , (SSEA-1, ECMA-7 等); 将胚盘细胞在无抑制分化因 但效率很低, ES 细胞技术也许能成为操纵禽类基因 素的悬浮培养体系中培养获得胚样体, 胚样体贴壁 2004-09-02 收稿, 2005-04- 18 收修改稿 * 国家自然科学基金资助项目(批准号: ** 联系人, E-mail: lianzhx@, ninglbau@ SCIENCE IN CHINA Ser. C Life Sciences 第3