冠毒素高产菌株的半推理选育.pdfVIP

第30卷第5期 江 西 农 业 大 学 学 报 Vo1．30，No．5 2008年 lO月 ActaAgriculturaeUniversitatisJiangxiensis Oct．，2008 文章编号：1000—2286(2008)05—0888—06 冠毒素高产菌株的半推理选育 吴晓玉 ，储 炬 ，王园秀2 (1．华东理工大学 生物反应器国家重点实验室，上海 200237；2．江西农业大学 生物科学与工程学院，江西 南昌 330045) 摘要：根据菌株利用萘为碳源与冠毒素生物合成的调控均受低温影响的特点，以及菌株对红霉索耐药机制受细 胞膜孔蛋白和外排泵影响的特性。分别以菌株对萘代谢的温度敏感性及对红霉素抗性为筛选标志，依次采用亚 硝基胍、5一溴尿嘧啶、紫外线、吖啶橙与紫外线混合等诱变方式，经系列推理选育，获得产冠毒素能力为 100txg／mL的突变菌株Y57。比野生菌株BCC933产量提高7．3倍。 关键词：突变菌株；冠毒素；诱变剂；红霉素；萘 中图分类号：Q93—33 文献标识码：A Half——rationalScreeningofMutantOverproducingCoronatine WU Xiao—yu ，CHU Ju ，WANGYuan—xiu (1．TheStateKeyLabofBioreactorEngineering，EastChinaUniversityofScienceandTechnology， Shanghai200237，China；2．CoUegeofBioscienceandBioengineering，JAU，Nanchang330045，China) Abstract：Onbasisofscreeninglabelsoftemperature—-sensitivityofnaphthalenemetabolism anderyhtro·· mycinresisatnce．htehigh—yieldmutantY57wasscreenedandobtainedafterthewildtypestrainBCC933 wastreatedwithchemical andphysicalreagentssuchasNTG，5一BUandUVaswellasacridineorangeinte— gratedwithUV．Accordingtohtereposedresults，boht ofnaphthalenemetabolismsascarbonsourceandcoro— nafinebiosynhtesisinbacteriaweresensitivetolowtemperature，andtheresistancetoerythromycininbacteria resultedfromeffectsofporinsincellmembraneandeffluxpump．MuatntY57producingcoronatine100 g／ mLWaSachievedinshakeflaskculture，whichwasnearly7．3timeshigherhtanhtatofwildstrain． Keywords：mutnat；coronatine；mutagen；erythromycin；naphhtalene 菌种选育是微生物次级代谢产物的产量和质量不断提高最主要和最根本的环节，通过人为打破菌 体 自身代谢调控系统，而达到改良菌种特性。从菌株选育方法发展来看，有经典的随机诱变选育(ran— dommutation)如物理、化学因子诱变等，半理性选育(semi—rationalmuattion)如原生质体融合(protoplast fusion)、基因组重组(genomeshuffling)等及理性选育(rationalmuattion)如采用途径工程(pathwayengi— neering)手段进行定点基因突变(site—directedmuatgenesis)、敲入(knock—in)、敲除(knock—out)、删除 (in—framedeletion)等。仅根据随机诱变和大量摇瓶试验获得所需突变株的随机选育，工作量大而效 率低；虽然通过构建工