清热利胆理气活血法对胆囊收缩素受体地调节作用.pdfVIP

清热利胆理气活血法对胆囊收缩素受体的调节作用 傅华群，吴伟顶，邹书兵，黄明文，黄长文，关晏星，徐艳萍 江西医学院第二附属医院肝胆外科研究所(南昌330006) 摘要目的：探讨中医清热利胆、理气活血疗法对胆囊收缩素受体(CCK—R)表达的调节及作用机制。方 法：采用放射免疫分析法和受体放射配基结合法检测对照组、高胆固醇组、自然恢复组及治疗组豚鼠门静脉血 上述各项指标正常。结论：清热利胆、理气活血可能通过上调胆囊CCK—R表达促进胆囊动力功能恢复，其作 用机制可能与降低胆汁中胆固醇浓度有关。 关键词：胆汁；胆固醇；胆囊收缩素受体；清热利胆；理气活血 临床实践证明，中医学清热利胆、理气活血疗法可以调节胆囊运动功能，缓解临床症状，但作用机理仍不完 全清楚。近年来，胆囊收缩功能障碍时胆囊收缩素受体(CCK—R)的调节变化已引起重视。本实验采用豚鼠制 作胆囊收缩功能障碍的动物模型，研究中医中药与CCK—R之间的联系，旨在探讨清热利胆、理气活血疗法对 胆囊CCK—R的调节及作用机理。 1材料与方法 1．1主要试剂 CCK放免药盒(英国皇家医学研究生院提供)，“I—CCK—OP，比活度2200 CCK—OP、EGTA、大豆胰蛋白酶抑制剂、牛血清白蛋白、HEPES(购自Si目axa公司)。 1．2药品 根据天津市南开医院“利胆汤”加减，由金钱草、虎杖、茵陈、赤芍、丹参、枳壳、大黄等15味中药组成。本院 制剂室制成中药口服液，生药含量6．75g／Hd。 】．3动物分组及处理 实验用短毛雄性豚鼠100只(江西省医学实验动物中心提供)，体重350—400 g，随机分为4组，每组25只。 对照组：标准颗粒饲料饲养2周；高胆固醇组：标准颗粒饲料加人2％胆固醇，按文献制作胆囊收缩功能障碍动 物模型；自然恢复组：高胆固醇组2周后，标准颗粒饲料饲养2周；治疗组：高胆固醇组2周后，标准颗粒饲料饲 养加中药灌胃2周(30∥(ks·d)灌胃，1次／d)。 1．4标本采集 各组豚鼠实验到期后，又随机分为空腹(12只)、餐后(13只)两亚组。空腹组禁食12h，餐后组禁食12h后， 液体脂餐15 ml／k体重灌胃，剖腹取材。 xH(cm3)计算胆囊体积。 1 4．2胆汁量、性状及成分分析用血管钳阻断胆囊管，一次性注射器吸取胆囊内全部胆汁置试管中，记录胆 汁量，取少许于偏光显微镜下观察胆汁性状，其余即送实验室测量胆汁中胆固醇浓度。 ml，置预冷含10％EDTA—Na 1．4．3门静脉血浆用预冷的一次性注射器抽取门静脉血2 40∞和抑肽酶15正 000 的试管中，4。C条件下2 r／mln离心30mill，取血清置一20℃保存待测。 1．4．4胆囊组织完整取下胆囊，纵行剪开，收集胆汁沉积物，滤纸吸净，迅速置液氮管中保存待测。 1．5胆囊平滑肌细胞膜受体制备 按改良UPP法，胆囊置于lOnd预冷的匀浆缓冲液(含蔗糖250rm-,ol／L，帆PES10ir，rnol／L，大豆胰蛋白酶抑 管，2500 r／min(4。C)离心5min。收集上清液于干净离心管，收集沉淀于匀浆缓冲液，重新匀浆，离心，收集上清 000 25 液。合并两上清液，20 rain，收集沉淀，加入HEPKS缓冲液(含HEPES r／min(40C)离心45 rrwlol／L，MgCl2 2．5 137 O．7 mmol／L，GlucoselO rrnm,ol／L，NaCl mM，明胶1％)摇匀，即为粗制膜受体，部分以牛血 nm-,ol／L，NaH2P04 清白蛋白为标准，用Lowery法测定蛋白含量，其余用于下一步配合结合反应。 1．6 CCK—It的检测 CCK—R