PSF真核表达载体的构建及细胞内表达和定位.pdfVIP

中国热带医学2010 年第10 卷第9 期 CHINA TROPICAL MEDICINE Vol . 10 No .9 September 2010 1067 ［论 著］ PSF 真核表达载体的构建及细胞内表达和定位 1 2 2 2* 张秀娟 ，王娟 ，邓鹏 ，姜勇 摘要：目的 构建小鼠多嘧啶束结合蛋白相关剪切因子（PSF）真核表达载体并在小鼠Hepa 1-6 肝癌细胞内表达， 观察PSF 胞内定位及脂多糖（LPS）对其定位的影响。 方法 提取小鼠肝组织总RNA，RT-PCR 扩增小鼠PSF 基因的 蛋白编码序列；采用基因重组技术将其亚克隆至pcDNA3-HA 真核表达载体中，将该载体瞬时转染Hepa 1-6 细胞，通 过细胞免疫荧光方法观察PSF 的胞内表达及LPS 对其定位的影响。 结果 酶切和DNA 测序证明所构建质粒正确； 细胞免疫荧光可见PSF 在Hepa 1-6 细胞内表达后只分布于细胞核，LPS 刺激后PSF 分布无明显变化。 结论 成功 构建PSF 真核表达载体，为研究PSF 在基因表达调控中作用及其生物功能提供了重要载体；进一步证实PSF 为定位于 细胞核的核蛋白。 关键词：多嘧啶束结合蛋白相关剪切因子；蛋白表达；蛋白定位 中图分类号：RQ291 文献标识码：A 文章编号：1009-9727 （2010）9-1067-02 Construction of the eukaryotic expression vector of PSF and its expression and location in cells. ZHANG Xiu- juan ，WANG Juan ，DENG Peng，et al. （1Department of Physiology ，Guangdong Medical College ，Zhanjiang 524023 ， Guangdong，P.R. China; 2 Key Laboratory of Functional Proteomics of Guangdong Province ，Southern Medical University ， Guangzhou 510515 ，Guangdong，P.R. China） Abstract ：Aim To construct the eukaryotic expression vector of mouse polypyrimidine tract-binding protein-associated splicing factor （PSF）gene and express it in murine Hepa 1-6 hepatoma cell lines ，and to observe the location of PSF and the effect of lipopolysaccharide （LPS）on the location. Methods Total RNA was extracted from mouse liver ，and the code sequence of PSF gene was amplified by reverse transcription polymerase chain reaction （RT-PCR）. By gene recombination