毛细管电泳-双光子激发荧光检测研究.pdfVIP

毛细管电泳．双光子激发荧光检测研究 刘笔锋。 (华中科技大学生命科学与技术学院，武汉430074 摘要：提出了一种新的激光谤导荧光拴剥技术，即基于连续光的双光子激 发荧光，并应用于毛细管电泳分析。首先从理论上论证了方法的可能性，并研 制出毛细管电泳一双光于激发荧光装置；对比了枉上与拉后检测模式的差异，并 将谊乐统成功地应用于生物和环境分析。 关键词：毛细管电泳；兢光子激发荧光检测；生物分析 毛细管电泳经历加年的发展，技术上已逐步 荧光是可能的。为此，我们构建了一套毛细管电 成熟。在生命科学、环境和药物等领域获得了广 泳．双光于激发荧光系统。采用廉价的半导体红外 泛应用。将阵列毛细管电泳用于大规模基因组测 激光器，在连续光状态下．以柱后检测的方式(图 序即是其中成功的范例之一。在检讨毛细管电泳 IA)实现了小分子荧光染料、荧光蛋白和量子点等 成功时，一个决定性因素，是检测技术的不断创 3种常用的标记物的电泳分离与双光子激发荧光 新，尤其是激光诱导荧光检测的发展，将检测灵 检测。进一步，我们发展了高效的柱上检测模式 敏度推进到梦寐以求的极限．单分子水平。于是， (图1B和C)，比较了方形毛细管与圆形一方形结合 高教分离技术与高灵敏度检测器的联用，即毛细 毛细管在分离与检测上的差异，结果表明，圆形- 管电泳-激光诱导荧光检测，成为绝对主流的组 方形结合毛细管(圆形部分用于分离、方形部分用 合。与此同时，各种荧光光谱技术的引人，如荧光 于检测)能够在保持样品高效分离的同时，可以实 偏振、多光子激发荧光、荧光相关谱、荧光寿命和 现高灵敏度柱上检测。图2给出了9种生物胺的 全内反射等，极大地丰富丁激光诱导荧光检测技 CE-CWMPE测量结果。 术的发展。 Shear研究组12首次将多光子激发荧光检铡 技术引人毛细管电诛，他们采用钛蓝宝石飞秽激 —百 光器，实现了柱后双光子激发荧光检测。采用基 F亨年兰鼍c 于飞秒脉冲激光技术的多光子激发荧光的优点在 匕：====七====；：==一 于：I非常低的检测背景和几级的检测体积，因 此，很容易实现勰dp珊山水平的检测限；2容 同删雌审 国 易实现超快反应过程检测；3超宽谱带激发，因 f豫Im嘲时cmmgtlra岫x 此可以避免复杂样品对多激光谱线的要求。然而， 为验证系统的可靠性和潜在分析能力，我们 飞秒脉冲激光器过于昂贵的费用使其在毛细管电 进一步将该系统应用应用于生物和环境分析，如 泳领域很难获得广泛应用。 氪基酸、磷酸化氢基酸、有机胺和大分子DNA和 本文研究的重点集中在发展基于连续光激发 蛋白质等，定量分析检测的灵敏度为s出vZa(浓度 的多光子荧光技术(CV／MPE)，用于毛细管电泳 检测限)和删(质量检测限)水平，校正曲线的线 (cE)检测9“。 性范围超过2个数量级。这表明．本文所建立的新 理论分析表明，采用连续光获得双光子激发