Exosomes对L1210肿瘤细胞攻击免疫保护作用研究.pdfVIP

D105．Exosomes对L1210肿瘤细胞攻击的免疫保护作用研究 }宁孙秉中 E—mail：bnbu(鱼163．㈣ 第四军医大学西京医院血液科 (西安710032) 背景及目的 s。me是由多种类型细胞中的晚期内质体储酶体与细胞膜融合时，释放到细胞外的膜性微囊泡。研 小鼠肿瘤模型中证明其有潜在的免疫调节功能，故exosomeS可以作为一种新的非细胞肿瘤疫苗，用 于肿瘤的免疫治疗。本研究的目的是用离心超滤和蔗糖密度梯度离心法分离出L1210细胞来源的 将L1210细胞置 exosofiles，观察exosomes对L1210细胞肿瘤细胞攻击的免疫保护作用。方法 心50min，收集底部的缓冲垫，PBS稀释，100 somes。将DBA／2小鼠随机分为3组：即exosomes 病细胞。5“g组免疫后的小鼠拉颈处死，无菌取出脾脏，研磨，Trls—NH4CL裂解红细胞，生理盐水 x 洗涤，尼龙毛柱分离法分离得到T淋巴细胞并计数，将所得细胞稀释成i 107／mL之悬液。以 MTr溶液20“l，37℃，继续孵育4h，终止培养。每孔加入150／11DMSO，震荡10m，选择 5mg／ml 490nm波长。在酶联免疫检测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，计算杀伤率。结果电镜下 镜标记，囊外膜及腔内可见点状颗粒状标记物，在同一个exosomes上最多可有5个标记颗粒。其 40％(8／20)，5,ug组成瘤率为15％(3／20)，2．5p．g组及5旭组与生理盐水对照组的成瘤率相比有统 胞，日。sⅢ$免疫小鼠的T细胞为效应细胞，按不同效靶比例进行M兀、实验。在效靶比为12．5：1，25： Exc)sornes 生成较高水平的CTL活性，与生理盐水对照组相比有统计学差异(P0．05)。结论 预防接种，有明显的抵抗肿瘤生长作用，是一种有效的肿瘤疫苗。Exommes为非活体细胞，膜很稳 定j无致瘤性。可以高效地将抗原由抗原提呈细胞(arc)传递给APC，促发并扩大抗原特异性免疫 血液肿瘤的免疫治疗提供一条新的途径。 陈万红孙竞 林榕易正山 广州南方医院血液科 (广州510515) 目的 和／或肿瘤疫苗免疫小鼠，随后用EL9611细胞(红自血病细胞)进行攻击，观察其诱导抗白血病特异 性免疫能力的效应。并初步探讨其免疫机理。为CpG+GM—CSF用于抗白血病免疫治疗提供理论 和实验依据。方法 免疫治疗。各小鼠每次接受的免疫制剂均用PBS液调整为0．2ml。采用尾根部皮下免疫。共免疫3 死小鼠脾脏)，采用尾静脉注射，观察发病情况。4、通过外周血涂片和病理形态观察明确小鼠死因。接 种EL9611细胞后超过60天，外周血涂片未见有幼红细胞者，为长期无病生存。结果与结论l、所 有死亡小鼠经外周血涂片和病理检查证实均死于红白血病。2、在红白血病细胞攻击后ABC三组小 鼠均全部死亡，其平均生存时间分别为：肿瘤疫苗组19．8±6．2天，佐剂组18．5±5．8天，均比对照 说明用CpG+GM—CSF联合疫苗的免疫治疗不仅可以显著延长小鼠的生存时间，而且可以提高小 0．257)。经佐剂免疫小鼠的血清IL一4水平与对照组比较有显著下降，佐剂组54．92±1．61pg／ml。 诱导了n11型免疫反应，也说明其通过诱导Thl型免疫反应而增强了特异性抗白血病免疫能力。 4、经用CpG+GM—CSF十疫苗免疫治疗后小鼠脾细胞对红白血病细胞的特异性杀伤活力明显提 高，而单用疫苗或单用佐剂治疗的小鼠其脾细胞对EL9611细胞的细胞毒活力虽然有所提高，但与对 照组比较尚未见明显的差异。各组小鼠脾细胞对于正常脾细胞的杀伤活力则无明显的差异。联合组 的杀伤活力．三组间比较无显著差异。体外实验证实，单用佐剂和肿瘤疫苗都难以产生较好的抗白 血病特异性免疫能力，只有联合佐剂CpG+GM—CSF和肿瘤疫苗一起免疫才能产生抗白血病特异 性免疫能力。