氟铃脲对粉纹夜蛾TN-5B1-4细胞生长抑制作用研究.pdfVIP

第八届全国农药交流会论文集 299 氟铃脲对粉纹夜蛾TN一5B1-4细胞的生长抑制作用研究 詹泰松，刘扬，黄青春 (华东理工大学药学院) 相对于传统农药而言，昆虫生长调节剂对害虫的选择性高，对哺乳动物安全，对环境友好，易于被土 壤中的微生物所降解，被称为第三代农药。近年来，昆虫生长调节剂在昆虫内分泌系统中的作用特点和作 用规律越来越受到重视。昆虫激素的类似物如：RH5992，在昆虫体内通过模拟p一二十羟基蜕皮酮(20E) 属于苯甲酰基脲类昆虫生长调节剂，通过抑制昆虫表皮中几丁质的合成代谢，引起昆虫不能正常蜕皮而死 亡。文献表明，该类药剂在昆虫体内还干扰DNA或RNA的合成。本文在离体条件下初步研究了氟铃脲对 粉纹夜蛾TN一5814细胞的生长抑制作用，旨在探讨昆虫几丁质合成抑制剂在细胞水平上的作用特点。 l材料与方法 1．1药剂 氟铃脲原药，纯度为97％，由扬农化工集团提供。使用时，用丙酮将原药配制成40M的母液，密封 备用。中性红测试液的配制：将中性红溶于重蒸水中，配制成5mg／mL溶液。 1．2细胞培养 粉纹夜蛾TN一5B1．4细胞在25 TNM．FH cm：方瓶中贴壁培养，置于27*(2恒温箱中。培养基组成为：HyQ 培养基，10％PAA，Gibico双抗(100ui青霉素+100pg／mL链霉素)。培养3～4天传代一次，接种密度为 2×105个／mL。 1．3细胞毒性测定 采用中性红实验法。将吹匀的细胞悬浮液滴加于96孔板中，每孔100肚L，然后置于27*(2恒温箱中培 养过夜。每孔滴加5此氟铃脲溶液，使得最终的浓度梯度为10南、10一、10’4M，分别在培养0、6、12、 24、48、60、72、96、132 540 h时测试细胞的吸光度值(ODnm)。中性红测试液于各测定时间2h前滴加， 每孔2此，滴加后放回至恒温箱中培养。每浓度设3个重复。 1．4细胞形态观察 将细胞传代至25cm=方瓶中，接种密度为2×l05个／mL，培养过夜后，滴加氟铃脲溶液，使得终浓度 为10。M，分别在0、24、60、96、120h时于倒置显微镜(LEIKAFW4000)下进行拍照，观察细胞形态 的变化规律。 2结果 2．1 TN一5814细胞的生长规律 粉纹夜蛾TN一5Bi-4细胞在HyQTNM-FH培养基中能够较好地生长(图1)。在132h培养时间内，细 胞生长呈现两个阶段，0～12 h h为生长适应期，细胞数量没有显著的变化；12h以后为持续生长期，132 8。 时细胞群体的吸光度值约达0．1 *1应m ，一l FH培养基±的生长规律 图l TN椰14细胞在HyQTNM 22氟铃腻的抑制作用 氟赞脲对下N5814细胞的生长具有较强的抑制作甩，且抑制作用与药剂的浓度和作用时问相关(圈 h后药剂对 2)。在104M氟铃脲的作用下，24h时药剂稍微促进细胞的生长，促进率约为8％左右，但48 3％。l矿M氟特脲对细胞生长的抑制作用表现为 h时药女4的抑制率为29 细胞生长即表现为抑制作用。132 32 7％。实验表明，氟铃脲的浓度越大．其 正相关线性关系，24h的抑制率为186％，1h时的抑制率达54 对细胞的抑制率就越高，毒