副溶血性弧菌03：K6克隆系统性毒力基因、毒力岛VPaI-1、VPaI-5、VPaI-7与两个T3SSs的研究.pdfVIP

优秀论文提名奖论文蟋》 425 T050068 I-1、 副溶血性弧茵03：K6克隆系统性毒力基因、毒力岛VPa VPaI-5、VPa I-7及两个T3SSs的研究木 巢国祥1’2”焦新安¨”杨振泉1潘志明1黄金林1 王 芳1周丽萍2钱晓勤2 (1．扬州大学江苏扬州225009；2．扬州市疾病预防控制中心江苏扬州225002) 摘要：本文针对来自临床和食物源的235株副溶血性弧菌分离株，检测已知的毒力因子(taAtrh)．03：K6克隆 以及两个IⅡ型分泌系统(T3SSl和T3SS2)。结果表明，所有的235株分离株都含有全部或部分的T3SSl基因．所有的103 主要危害因子． 关键词：副溶血J幽r瓜菌；流行克隆；系统性毒力基因；毒力岛；Ⅲ型分泌系统 引言 副溶血性弧菌是近年来世界范围内拥有海岸线国家的重要食源性致病菌，导致了约50％的食物中毒 或同时产生两种毒素。自1996年以来，出现了03：K6副溶血性弧菌大流行株(高致病株)的流行。大流 新的03：K6型菌株出现是由于大片段的基因片段转移而形成的。一些基因片段，例如独特的toxRS 大流行株组特异性序列(PGS)，对03：K6型菌株均是独特的，是大流行株组特异性鉴定的重要方法。 基因毒力岛(GIs)是染色体区域上的另一组毒力因子，它们通过基因水平转移而获得，其功能为 增加细菌在特定环境中的适应能力。GIs的DNA序列的组成与宿主基因组中G+C含量，基因组标记和 VPaI—1．VPaI一7)，大小均在10kb以上；这些GIs与其核心基因相比具有异常的组成结构。 项目。本文发表于美国Foodbome andDisease杂志2009第6期(P289—298)，原有内容部分删节。 Pathogens ”作者简介：巢国祥，博士研究生，研究方向：人兽共患病学，E-mail：cgxl816@sina．com。 “+通信作者：焦新安，博士生导师，电话：0514-E-mail：jiao@yzu．edu．cn。 426蟋》2009年学术年会 位于大小染色体上。T3SSl缺失突变体与野生型相比显著降低了细胞毒性，而T3SS2缺失突变体在兔回 副溶血性弧菌致病株及03：K6的高毒力株(大流行株)中…。 在本研究中，我们对110株临床分离株和125株食物分离株中大流行株的系统功能基因(tdh， 进行鉴定分析，以了解不同来源的副溶血性弧菌重要的毒力岛GIs，T3SSs和毒力基因的分布及相互关 系。 1材料和方法 1．1细菌分离株和血清分型 本文共有235株副溶血性弧菌分离株：110株是临床分离株，125株是食物分离株。食物分离株来自 水产品(包括海产品和淡水产品)，临床株来自在食物中毒暴发事件中的病人和食源性疾病主动监测医院 所有的分离株在2005．2008年5月至12月期间从江苏的8个城市收集。 1．2PCP．multi-PCR 个trh基因。 GS—PCR的检测是按描述的引物GS—VPI和GS．VP2完成的f2j。 8．3，500mMKCI，60mM rids—HCl，pH pmol／laL) dNTPs(10 Thermal O．3pL，0．5pL mM)，0．51aLTaq 最后一步延伸72℃7min。 GS—PCR，trh—PCR和多重PCR的扩增产物电泳后，用紫外成像系统仪成像。 2结果 2．1副溶血性弧菌的致病株，大流行株，非致病株在食品和临床分离株上的分布 副溶血性弧菌的菌株可分为致病株，大流行株和非致病株。致病株的特征是tdh或trh阳性。大 病株(表1)。